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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔牙周膜干采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔牙周膜干經(jīng)CD44免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔牙周膜干原代細(xì)胞 | 組織來源 | 牙周膜 |
英文名稱 | Rabbit Periodontal Ligament Stem Cells | 貨號(hào) | YS-01X7970 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
兔牙周膜干細(xì)胞分離自牙周膜組織；牙周膜（牙周韌帶、牙周間隙）是由致密結(jié)締組織所構(gòu)成。多數(shù)纖維排列成束，纖維的一端埋于牙骨質(zhì)內(nèi)，另一端則埋于牙槽窩骨壁里，使牙齒固位于牙槽窩內(nèi)；牙周膜內(nèi)有、血管、淋巴和上皮細(xì)胞等。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）來源于胚胎時(shí)期的中胚層組織，具有很強(qiáng)的自我復(fù)制和多向分化潛能，具有向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及肌細(xì)胞等多種終末細(xì)胞定向分化的能力，運(yùn)用 MSCs來修復(fù)軟骨損傷具有很好的應(yīng)用前景，目前已能夠從骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉等組織以及羊水、臍帶、臍帶血中分離和制備間充質(zhì)干細(xì)胞。牙周膜干細(xì)胞參與了牙周組織的病變、修復(fù)及再生過程。現(xiàn)在，利用牙周膜干細(xì)胞建立體外模型，已經(jīng)成為有關(guān)員研究牙周組織疾病的重要手段。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔牙周膜干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
穩(wěn)定表達(dá)EBNA1的人胚腎細(xì)胞;293E | 白細(xì)胞介素-2單克隆抗體 |
對(duì)氧0酶3抗體 | 碳酸酶10抗體 |
叉頭蛋白H1抗體 | 精/富含卷曲蛋白1抗體 |
鈣激活蛋白酶14抗體 | ETS相關(guān)蛋白71抗體 |
20號(hào)染色體開放閱讀框78抗體 | 組蛋白H2AZ抗體 |
TMED4 Others Human 人 TMED4 / ERS25 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | FCGR3B Others Human 人 CD16b / FCGR3B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞;NCI-H157 | IL18RAP Others Cynomolgus 食蟹猴 IL18RAP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
NCR3 Others Human 人 NKp30 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | IFNAR1 Others Human 人 IFNAR1 / IFNAR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
ICAM1 Others Human 人 ICAM-1 / CD54 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | TSPAN1 Others Human 人 TSPAN1 (aa 110-211) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
CM-R068大鼠腎小管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔牙周膜干原代細(xì)胞精/富含卷曲蛋白1抗體 |
FCGR3A Others Human 人 CD16a / FCGR3A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | HET-1A, 人食管上皮細(xì)胞 Human |
人T淋巴瘤轉(zhuǎn)基因細(xì)胞;Jurkat D,E | hMoCD14+-PB single donorPellet 人類外周血CD14+單核細(xì)胞團(tuán)塊單一來源，超 > 1 mio.cells 人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞RNAHBMEC miRNA5 μg |
P9小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞 P9 mouse bone marrow somal cells 1640+10%FBS | C型凝集素4家族E抗體 |
淋巴細(xì)胞性白血病相關(guān)序列1抗體 | LILRA3 Others Human 人 ILT6 / LILRA3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
表皮生長因子反應(yīng)蛋白2抗體 | NADPH氧化酶4抗體 |
糖蛋白0脂酶D抗體 | TMED4 Others Human 人 TMED4 / ERS25 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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