兔胸腺淋巴原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代嗅鞘細(xì)胞 Hep G2(人肝癌細(xì)胞) H4 人膠質(zhì)瘤細(xì)胞 1ml/T75 M14 人黑色素瘤細(xì)胞 SK-HEP-1 人肝癌細(xì)胞 小鼠原代精原干細(xì)胞

兔胸腺淋巴原代細(xì)胞

兔胸腺淋巴細(xì)胞分離自胸腺組織；胸腺是機(jī)體的重要淋巴器官，其功能與免疫緊密相關(guān)，是T細(xì)胞分化、發(fā)育、成熟的場(chǎng)所。其還可以分泌胸腺激素及激素類物質(zhì)，具內(nèi)分泌機(jī)能的器官。位于胸腔前縱隔。胚胎后期及初生時(shí)，是一生中重量相對(duì)大的時(shí)期。隨年齡增長(zhǎng)，胸腺繼續(xù)發(fā)育；此后胸腺逐漸退化，淋巴細(xì)胞減少，脂肪組織增多。胸腺的結(jié)構(gòu)表面有結(jié)締組織被膜，結(jié)締組織伸入胸腺實(shí)質(zhì)把胸腺分成許多不分隔的小葉。小葉周邊為皮質(zhì)，深部為髓質(zhì)。皮質(zhì)不包圍髓質(zhì)，相鄰小葉髓質(zhì)彼此銜接。皮質(zhì)主要由淋巴細(xì)胞和上皮性網(wǎng)狀細(xì)胞構(gòu)成，胞質(zhì)中有顆粒及泡狀結(jié)構(gòu)。網(wǎng)狀細(xì)胞間有密集的淋巴細(xì)胞。胸腺的淋巴細(xì)胞又稱為胸腺細(xì)胞，在皮質(zhì)淺層細(xì)胞較大，為較原始的淋巴細(xì)胞。中層為中等大小的淋巴細(xì)胞，深層為小淋巴細(xì)胞。從淺層到深層為造血干細(xì)胞增殖分化為小淋巴細(xì)胞的過(guò)程。皮質(zhì)內(nèi)還有巨噬細(xì)胞，無(wú)淋巴小結(jié)。髓質(zhì)中淋巴細(xì)胞少而稀疏，上皮性網(wǎng)狀細(xì)胞多而顯著。形態(tài)多樣，胞質(zhì)中有顆粒及泡狀結(jié)構(gòu)，為其分泌物，尚有散在的圓形的胸腺小體。

產(chǎn)品名稱：兔胸腺淋巴細(xì)胞

組織來(lái)源：胸腺

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：懸浮

細(xì)胞形態(tài)：圓形

傳代特性：不增殖；不傳代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔胸腺淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)室分離的兔胸腺淋巴采用機(jī)械研磨法結(jié)合密度梯度離心法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為1×106cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔胸腺淋巴經(jīng)過(guò)檢測(cè)，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。