詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔小氣道平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔小氣道平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔小氣道平滑肌原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 小氣道 |
英文名稱 | Rabbit Small Airway Smooth Muscle Cells | 貨號(hào) | YS-01X8455 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
兔小氣道平滑肌細(xì)胞分離自小氣道組織;臨床上通常將內(nèi)徑小于2mm的小細(xì)支氣管稱為小氣道。小氣道具有氣流阻力小,但易阻塞的特點(diǎn)。在平靜吸氣時(shí),空氣進(jìn)入狹窄的鼻咽部,產(chǎn)生渦流。由于小氣道已無(wú)軟骨支持,在脫離纖維鞘嵌入肺組織后,管腔通暢性不象軟骨性氣道,易于受胸腔的壓力變化的影響。小氣道上皮細(xì)胞形成連續(xù)呼吸道內(nèi)層,作為隔絕外界有害物質(zhì)的物理和功能屏障發(fā)揮著的作用。小氣道位于肺泡和氣管的交界處,這些細(xì)胞在功能上能夠調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、產(chǎn)生化學(xué)因子進(jìn)行宿主防御、表達(dá)粘附分子,并可能通過(guò)HLA-DR表達(dá)呈遞抗原;它們還能產(chǎn)生液體有助于肺液的平衡。許多呼吸道疾病,如哮喘、支氣管炎、慢性阻塞性肺病和囊性纖維化,都涉及呼吸道表面上皮細(xì)胞的破壞;小氣道上皮細(xì)胞的培養(yǎng)可為防止呼吸道擴(kuò)增疾病和重塑提供新的治療選擇。小氣道平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展,細(xì)胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細(xì)胞匯合,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng),高低起伏;細(xì)胞密度低時(shí),常交織成網(wǎng)狀;密度高時(shí),則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。小氣道的生理功能特點(diǎn):①小氣道阻力?。虎跉饬魉俣嚷虎劭烧{(diào)節(jié)控制通氣與血流比例。小氣管平滑肌細(xì)胞主要功能:①保持氣道張力維持小氣道形態(tài);②肺小氣道進(jìn)行氣體交換,病變可引起換氣功能障礙;③炎癥、痰液阻塞或當(dāng)氣道外壓大于氣道內(nèi)壓時(shí)容易造成小氣道閉合、萎陷。小氣管平滑肌細(xì)胞與主要病生理變化:①支氣管炎;②肺氣腫;③慢性阻塞性肺疾病。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:基礎(chǔ)培養(yǎng)基,含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔小氣道平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品:
小耳豬肺細(xì)胞;SEP-L1 | 胰島素受體底物-1抗體 |
旁瘤抗原MA1抗體 | 碳酸酶6抗體 |
細(xì)胞外基質(zhì)蛋白FREM1抗體 | 甲基單克隆抗體 |
巨噬細(xì)胞炎性蛋白16抗體 | 尤文氏肉瘤相關(guān)EWS蛋白抗體 |
C2CD3蛋白抗體 | 艾滋病病毒p55抗體 |
PTPN12 Others Human 人 PTPN12 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Indonesia/5/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞HPAF | HA Others H10N3 甲型流感 H10N3 (A/mallard/Minnesota/Sg-00194/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
293T(人胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H051人胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞培養(yǎng)基100mL 人膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞RNAHBdSF miRNA5 μg | HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
CHST3 Others Mouse 小鼠 CHST3 / C6ST-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 3D4/21豬肺泡巨噬細(xì)胞 Porcine alveolar macrophage 3D4/21 1640+10% FBS+0.1mM NEAA+1mM 酸 |
CM-R087大鼠軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔小氣道平滑肌原代細(xì)胞甲基單克隆抗體 |
SiHa細(xì)胞,子細(xì)胞 人鼻咽癌母系細(xì)胞,CNE-2Z細(xì)胞 CL-0240V79(倉(cāng)鼠肺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞HLEC |
CM-H120人元細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | DPEP2 Others Human 人 DPEP2 / MBD-2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
KLK4 Others Human 人 KLK-4 / Kallikrein-4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 2號(hào)染色體開放閱讀框42抗體 |
酸化富亮重復(fù)激酶2抗體 | MOLT-4細(xì)胞,急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 髓性甲狀腺癌細(xì)胞,TT細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(傣族);KM9403 |
殺菌通透性增加蛋白樣1抗體 | 胞質(zhì)5'核苷酸酶1A抗體 |
酸化G蛋白通路抑制蛋白1抗體 | PTPN12 Others Human 人 PTPN12 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
操作步驟:
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。