化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔下丘腦元采用消化法結(jié)合元專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔下丘腦元經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔下丘腦神經(jīng)元原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 腦 |
英文名稱 | Rabbit Hypothalamic Neuron Cells | 貨號(hào) | YS-01X7863 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
兔下丘腦元細(xì)胞分離自下丘腦；下丘腦又稱丘腦下部，位于大腦腹面、丘腦的下方，是調(diào)節(jié)內(nèi)臟活動(dòng)和內(nèi)分泌活動(dòng)的較高級(jí)中樞所在。下丘腦自前向后可分三部﹐即前部（又名視前區(qū)和視上區(qū)）﹑中部（結(jié)節(jié)區(qū)）和后部（乳頭體區(qū)）。下丘腦具有許多細(xì)胞核團(tuán)和纖維束﹐與中樞系統(tǒng)的其它部位具有密切的相互聯(lián)系。它不僅通過(guò)和血管途徑調(diào)節(jié)腦垂體前﹑后葉激素的分泌和釋放﹐而且還參與調(diào)節(jié)自主系統(tǒng)﹐如控制水鹽代謝﹑調(diào)節(jié)體溫﹑攝食﹑睡眠﹑生殖、內(nèi)臟活動(dòng)以及情緒等。下丘腦元與來(lái)自其他部位的纖維有廣泛的突觸聯(lián)系，可以接受很多沖動(dòng)，為內(nèi)分泌系統(tǒng)和系統(tǒng)的中心。它們能調(diào)節(jié)垂體前葉功能，合成垂體激素及控制自主和植物功能。故提取下丘腦元進(jìn)行體外培養(yǎng)，建立下丘腦元體外實(shí)驗(yàn)平臺(tái)具有重要意義。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基：含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：元細(xì)胞樣
傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔下丘腦元細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
小膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)添加物MGS | 抑制素A/Inhibin βA抗體 |
ETS結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子FEV抗體 | 細(xì)胞表面趨化因子受體7抗體 |
CD344抗體 | 丙蛋白激酶C底物Marcks抗體 |
原癌蛋白CBL2抗體 | 核糖體RNA合成蛋白42抗體 |
2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框53抗體 | 22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框28抗體 |
EGFL7 Others Mouse 小鼠 EGFL7 / VE-statin 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | Promocell C-22062 Smooth Muscle Cell GrowthMedium 2,, 平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基2型(即用型) 500ml |
人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞RNAHPASMC miRNA5 μg | MTDH Others Human 人 MTDH / lyric / metadherin 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
22RV1(人前列腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H043人肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基100mL 人骨骼肌成肌細(xì)胞RNAHSkMM miRNA5 μg | NP Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) Nucleocapsid / NP 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H209 大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | NHEM.f M2 Pellet 正常人表皮黑素細(xì)胞團(tuán)塊(少年者)，培養(yǎng)在M2培養(yǎng)液中 > 1 mio.cells 人氣管上皮細(xì)胞裂解物HTEpiCL |
CM-R095大鼠成年表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔下丘腦神經(jīng)元原代細(xì)胞丙蛋白激酶C底物Marcks抗體 |
SkMC-c 人骨骼肌細(xì)胞(SkMC) 500,000cells 心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 雜交瘤(B類(lèi));Z1510A2G6A2F8 |
人細(xì)胞;Hela 229 [HeLa229] | 猴源細(xì)胞 T細(xì)胞白血病，6T-CEM細(xì)胞 COLO-320(結(jié)腸腺癌細(xì)胞) |
CLDN11 Others Human 人 CLDN11 / Claudin-11 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 3號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框54抗體 |
細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子LDB1抗體 | JAR(人胎盤(pán)絨毛膜癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 MG-63, 人骨肉瘤細(xì)胞 人胃腺癌細(xì)胞;BGC-823 |
BRD1蛋白抗體 | 碘轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體 |
生長(zhǎng)激素釋放激素抗體 | EGFL7 Others Mouse 小鼠 EGFL7 / VE-statin 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
化工儀器網(wǎng)