詳細介紹
兔外周血樹突狀原代細胞 (未成熟DC細胞)
兔外周血DC細胞分離自外周血,由外周血單核細胞誘導而成的;外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,再在從血液中提取分離得到造血干細胞,我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞,典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長,在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,細胞大而形態(tài)不規(guī)則,表面皺褶多,亦可見少量短刺狀突,胞內(nèi)細胞器豐富并可見吞噬泡,具有較強的遷移能力,伴隨有部分未誘導成的單核細胞,貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經(jīng)TNFα、LPS等誘導而成,多數(shù)呈懸浮生長, 細胞呈圓形,細胞體積進一步增大,表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導致自發(fā)分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志,主要通過形態(tài)學、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子,進而激活T淋巴細胞,誘導免疫應答,處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié);未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力,但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應答,不能激活T細胞的第二信號,可導致T細胞無能,從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低,一般在30%以下。
英文名稱 | Rabbit Peripheral Blood Immature Dendritic Cells | 組織來源 | 外周血 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8446 |
細胞形態(tài) | 圓形、梭形、多角形,形態(tài)多樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:兔外周血樹突狀細胞 (未成熟DC細胞)
組織來源:外周血
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:半貼壁半懸浮
細胞形態(tài):圓形、梭形、多角形,形態(tài)多樣
傳代特性:屬于高度分化細胞;屬于不增殖細胞群
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔外周血樹突狀細胞 (未成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的兔外周血未成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔外周血樹突狀細胞經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細胞形態(tài)等綜合鑒定,純度可達80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
小氣道平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | 整合素α7抗體 |
蛋白質(zhì)酸酶2調(diào)節(jié)亞基5C/PP2A-B56-γ抗體 | 鈣通道L型α2多肽抗體 |
FSD1蛋白抗體 | 酸化髓樣細胞白血病-1抗體 |
巨噬細胞炎性蛋白抗體 | 眼睛發(fā)育缺失蛋白EYA2抗體 |
2號染色體開放閱讀框61抗體 | 造血細胞激酶抗體 |
IL9 Others Human 人 IL-9 / Ierleukin-9 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | 人胚胎皮膚成纖維細胞;HES 人胎盤滋養(yǎng)層細胞培養(yǎng)基 100mL |
人肺動脈平滑肌細胞cDNAHPASMC cDNA | ERBB3 Others Rat 大鼠 HER3 / ErbB3 人細胞裂解液 (陽性對照) |
EFNB2 Others Mouse 小鼠 EFNB2 / EphrinB2 人細胞裂解液 (陽性對照) | HEXB Others Human 人 Hexosaminidase B / HEXB 人細胞裂解液 (陽性對照) |
MX-1(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 腮腺細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | HA Others H2N2 甲型流感 H2N2 (A/Canada/720/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CM-R101大鼠腦動脈血管平滑肌細胞培養(yǎng)基100mL | 兔外周血樹突狀原代細胞 (未成熟DC細胞)酸化髓樣細胞白血病-1抗體 |
INS-1(大鼠胰島細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 脆弱擬桿菌 | 人椎間盤髓核細胞培養(yǎng)基 100mL |
HCC1937(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 | Hs888Lu細胞,人肺成纖維細胞 人腎癌細胞系(769-P),769-P細胞 人真皮微血管內(nèi)皮細胞-HDMEC-a |
NCF2 Others Human 人 NCF-2 / NCF2 / P67phox 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | 2號染色體開放閱讀框69抗體 |
單絲蛋白激酶1+2抗體 | U251(人膠質(zhì)瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纖維細胞;C3H 10T1/2 2A6 |
腦蛋白44抗體 | 孤菲肽/痛敏肽抗體 |
生長激素受體抗體 | IL9 Others Human 人 IL-9 / Ierleukin-9 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |