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兔外周血樹突狀原代細(xì)胞 (成熟DC細(xì)胞)

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×10?
貨號 YS-01X8445 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 僅供科研實驗    
兔外周血樹突狀原代細(xì)胞 (成熟DC細(xì)胞)公司出售的產(chǎn)品:大鼠原代腎足突細(xì)胞 EAC(小鼠艾氏腹水癌細(xì)胞) TF-1 人紅白系白血病細(xì)胞 1ml/T75 JAR 人胎盤絨毛癌細(xì)胞 RD 人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞 小鼠原代前列腺成纖維細(xì)胞

詳細(xì)介紹

本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:

兔外周血樹突狀原代細(xì)胞 (成熟DC細(xì)胞)

方法簡介

實驗室分離的兔外周血成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細(xì)胞、培養(yǎng)過程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔外周血樹突狀細(xì)胞經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細(xì)胞形態(tài)等綜合鑒定,純度可達(dá)80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品名稱

兔外周血樹突狀原代細(xì)胞 (成熟DC細(xì)胞)

組織來源

外周血

英文名稱

Rabbit Peripheral Blood Maturation Dendritic Cells

貨號

YS-01X8445

產(chǎn)品規(guī)格

5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

用途

僅供科研實驗

 

細(xì)胞簡介:

兔外周血DC細(xì)胞分離自外周血,由外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的;外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中,再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞,我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞,在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。樹突狀細(xì)胞分為成熟樹突狀細(xì)胞和未成熟樹突狀細(xì)胞,典型的未成熟樹突狀細(xì)胞呈半貼壁生長,在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,細(xì)胞大而形態(tài)不規(guī)則,表面皺褶多,亦可見少量短刺狀突,胞內(nèi)細(xì)胞器豐富并可見吞噬泡,具有較強(qiáng)的遷移能力,伴隨有部分未誘導(dǎo)成的單核細(xì)胞,貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細(xì)胞由未成熟DC進(jìn)一步經(jīng)TNFα、LPS等誘導(dǎo)而成,多數(shù)呈懸浮生長, 細(xì)胞呈圓形,細(xì)胞體積進(jìn)一步增大,表面大量粗細(xì)不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),伴隨少量貼壁未成熟細(xì)胞或者單核細(xì)胞。未成熟DC細(xì)胞長時間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟。DC細(xì)胞尚無特異性細(xì)胞表面分子標(biāo)志,主要通過形態(tài)學(xué)、組合性細(xì)胞表面標(biāo)志、在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能激活初始T細(xì)胞等特征進(jìn)行鑒定。其中成熟樹突狀細(xì)胞表面高表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子,進(jìn)而激活T淋巴細(xì)胞,誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié);未成熟樹突狀細(xì)胞具有很強(qiáng)的抗原攝取加工能力,但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細(xì)胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答,不能激活T細(xì)胞的第二信號,可導(dǎo)致T細(xì)胞無能,從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細(xì)胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達(dá)較低,一般在30%以下。

兔外周血樹突狀原代細(xì)胞 (成熟DC細(xì)胞)

培養(yǎng)信息:

兔外周血樹突狀原代細(xì)胞 (成熟DC細(xì)胞)

培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性:半貼壁半懸浮

細(xì)胞形態(tài):圓形,樹突狀

傳代特性:屬于高度分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群

消化液:0.25%

培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO25%

兔外周血樹突狀細(xì)胞 (成熟DC細(xì)胞)體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

兔外周血樹突狀原代細(xì)胞 (成熟DC細(xì)胞)

細(xì)胞培養(yǎng)方法:

兔外周血樹突狀原代細(xì)胞 (成熟DC細(xì)胞)

1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;

③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇:

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;

④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作步驟:

兔外周血樹突狀原代細(xì)胞 (成熟DC細(xì)胞)
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。

3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。

7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。

10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。

公司產(chǎn)品:兔外周血樹突狀原代細(xì)胞 (成熟DC細(xì)胞)


TOV21G人卵巢癌細(xì)胞 Human ovarian cancer cell line TOV21G 1640+10FBS%

谷甘肽過氧化酶2抗體

ras癌基因家族Rab8蛋白/原癌基因c MEL抗體

細(xì)胞表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白8抗體

酸化自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體

單酰甘油脂肪酶抗體

上皮特異性ETs轉(zhuǎn)錄因子抗體

(II)輕鏈抗體

心肌營養(yǎng)素1抗體

肌球蛋白輕鏈1/3抗體

NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD)

U973 人白血病細(xì)胞

CL-0344HAN(人羊膜細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

NSC,大鼠干細(xì)胞

小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞MM

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0927

大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL

CL-0176OP9(小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-1 膀胱變移細(xì)胞癌,T-24細(xì)胞 U251(膠質(zhì)瘤細(xì)胞)

兔外周血樹突狀原代細(xì)胞 (成熟DC細(xì)胞)單酰甘油脂肪酶抗體

肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

VERO C1008 (E6)細(xì)胞,非洲綠猴腎細(xì)胞 CHO/dhFr-(中國倉鼠二氫還原酶缺陷細(xì)胞) 小鼠T淋巴瘤細(xì)胞(雞OVA基因修飾);E.G7-OVA

ARSA Others Mouse 小鼠 ARSA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

豬胚胎傳代細(xì)胞;ST

小氣道上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

原活化蛋白激酶3K10抗體

芳香胺N-乙?;D(zhuǎn)移酶抗體

人腎近曲小管上皮細(xì)胞裂解物HRPTEpiCL

乙?;M蛋白H2B抗體

白介素33抗體

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白70抗體

NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD)

 


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