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詳細介紹
兔退行性椎間盤髓核原代細胞
兔退行性椎間盤髓核細胞分離退行性椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，分為中央部的髓核，富于彈性的膠狀物質(zhì)；周圍部的纖維環(huán)，由多層纖維軟骨環(huán)按同心圓排列。上下有軟骨板，是透明軟骨復蓋于椎體上，下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構成，位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環(huán)成為堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉負荷。髓核，是乳白色半透明膠狀體，富于彈性，為椎間盤結構的一部分，位于兩軟骨板與纖維環(huán)之間。由縱橫交錯的纖維網(wǎng)狀結構即軟骨細胞和蛋白多糖黏液樣基質(zhì)構成的彈性膠凍物質(zhì)。嬰幼兒時期的髓核含水量為80%-90%，即使到了老年，其含水量也在70%上下。髓核在出生時體積大而松散，位于椎間盤的中央，至成年時位置移至椎間盤的中后部；在成年以前構成髓核的主要物質(zhì)是大量蛋白多糖復合體、膠原纖維和纖維軟骨，隨著年齡的增長，髓核中的蛋白多糖解聚增多，水分逐漸減少，膠原增粗并逐漸被纖維軟骨所替代。
英文名稱 | Rabbit Degenerative Intervertebral Disc Nucleus Pulposu Cells | 組織來源 | 椎間盤 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8441 |
細胞形態(tài) | 梭形、多角形 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔退行性椎間盤髓核細胞
組織來源：椎間盤
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基，含FBS、EGF、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每3-4天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：梭形、多角形
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔退行性椎間盤髓核細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的兔退行性椎間盤髓核采用膠原酶-蛋白酶混合消化法并結合軟骨細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔退行性椎間盤髓核經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞;SH2 | 白介素2受體β鏈抗體 IL-2Rβ |
端粒酶抑制因子PinX-1抗體 | 鈣結合蛋白1抗體 |
DNA解旋酶V抗體 | 酸化肝細胞生長因子受體(原癌基因)抗體 |
2號染色體開放閱讀框18抗體 | 紅細胞膜條帶4.1蛋白抗體 |
2號染色體開放閱讀框50抗體 | 透明質(zhì)酸合成酶2抗體 |
人脊髓星形膠質(zhì)細胞(HA-sp)(1×106) | EPHB6 Others Human 人 EphB6 / EPHB6 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人肺間充質(zhì)干細胞總RNAHPMSC NA | 小鼠海馬趾細胞(MH-h)(1×106) |
EFNB2 Others Mouse 小鼠 EFNB2 / EphrinB2 人細胞裂解液 (陽性對照) | LRG1 Others Human 人 LRG1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人主動脈平滑肌細胞 (HASMC)( 5×105 ) HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞 Human | NRG1 Others Human 人 NRG1-beta 1 (ECD) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CM-R109大鼠腦成纖維細胞培養(yǎng)基100mL | 兔退行性椎間盤髓核原代細胞酸化肝細胞生長因子受體(原癌基因)抗體 |
MET Others Canine 狗 c-MET / HGFR 人細胞裂解液 (陽性對照) | SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌耐藥細胞株 Human |
人APP基因轉染CHO細胞株;7WD10 | U-118 MG(人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤) 5×106cells/瓶×2 SK-OV-3 [SKOV-3](人卵巢癌細胞) |
HAVSMC, 人主動脈平滑肌細胞 小鼠T淋巴細胞瘤(SV40T抗原轉染)，Cyc-tAg細胞 HMy2.CIR(人B 淋巴母細胞) | 4號染色體開放閱讀框34抗體 |
跨膜蛋白TMEM176B抗體 | LTF Others Human 人 LTF / Lactoferrin / Lactoansferrin 人細胞裂解液 (陽性對照) |
嗜乳脂蛋白樣9抗體 | 核孔蛋白50抗體 |
胰高血糖素樣肽-1抗體 | 人脊髓星形膠質(zhì)細胞(HA-sp)(1×106) |
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