詳細(xì)介紹
兔胎盤(pán)間充質(zhì)干原代細(xì)胞
兔胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞分離自胎盤(pán)組織;胎盤(pán)(placenta)是哺乳動(dòng)物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長(zhǎng)成的母子間交換物質(zhì)的過(guò)渡性器官,由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育,依靠胎盤(pán)從母體取得營(yíng)養(yǎng),而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性。胎盤(pán)還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素,是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類(lèi)和魚(yú)類(lèi)也以胎生方式繁殖后代,胚胎生長(zhǎng)出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合,以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換,這樣的結(jié)構(gòu)稱(chēng)假胎盤(pán)。胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell,MSC)是一種多能干細(xì)胞,是具有自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞。在一定條件下,它可以分化成多種功能細(xì)胞像APSC多能細(xì)胞。在胚胎發(fā)育中來(lái)源于中胚層。在機(jī)體正常的組織損傷修復(fù)過(guò)程中,MSC是一種重要的參與組織再生的細(xì)胞庫(kù)。在組織損傷引起的特殊信號(hào)作用下,MSC遷移到受損部位,在局部聚集增殖,依據(jù)不同的損傷信號(hào)沿著不同途徑分化。MSC易于分離擴(kuò)增,體外倍增能力旺盛,能保持其多向分化能力。因此,MSC是一種實(shí)用的組織修復(fù)種子細(xì)胞。相較于其他干細(xì)胞,胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞具有來(lái)源方便,細(xì)胞數(shù)量充足,易于分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增和純化,傳代擴(kuò)增多代后仍具有干細(xì)胞特性。胎盤(pán)是干細(xì)胞的佳來(lái)源。
英文名稱(chēng) | Rabbit Placental Mesenchymal Stem Cells | 組織來(lái)源 | 胎盤(pán) |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8134 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱(chēng):兔胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞
組織來(lái)源:胎盤(pán)
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基:含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以?xún)?nèi)狀態(tài)佳
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔胎盤(pán)間充質(zhì)干采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔胎盤(pán)間充質(zhì)干經(jīng)CD90免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi);
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞;W6/32 | 白介素-17B抗體 |
絲/蘇蛋白酸酶4C抗體 | 毒蕈堿型乙酰受體M4抗體 |
巖藻糖變旋酶抗體 | 甘露聚糖結(jié)合凝集素絲肽酶1抗體 |
細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-2抗體 | 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子E2F7抗體 |
7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框65抗體 | 同源盒基因HOXA3蛋白抗體 |
TDGF1 Others Rat 大鼠 Cripto / TDGF1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | GP1BB Others Human 人 GP1Bβ / CD42c 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株;PG-BE1 | CLEC10A Others Mouse 小鼠 CLEC10A / MGL1 / CD301 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
UACC-812(人導(dǎo)管瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 EB-3 [EB3](人淋巴樣Butt淋巴瘤細(xì)胞) | BMPR1B Others Human 人 BMPR1B / ALK-6 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
CD69 Others Human 人 CD69 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | RIN-m5f(大鼠胰島β細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 SGC7901(胃腺癌細(xì)胞) |
CM-R113大鼠嗅鞘細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔胎盤(pán)間充質(zhì)干原代細(xì)胞甘露聚糖結(jié)合凝集素絲肽酶1抗體 |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0907 人表皮黑色素細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | U251 人膠質(zhì)瘤細(xì)胞 |
NCTC 1469(小鼠正常肝細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | C-33A細(xì)胞,人子細(xì)胞 兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,CCC-SMC-1細(xì)胞 人表皮角質(zhì)細(xì)胞-胎兒HEK-f |
SIGLEC6 Others Human 人 SIGLEC6 / CD327 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體 |
富含亮重復(fù)跨膜元蛋白4抗體 | 體細(xì)胞;HEL 人小腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
PHD指蛋白21A抗體 | 氯離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 |
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4抗體 | TDGF1 Others Rat 大鼠 Cripto / TDGF1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |