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兔腎足突原代細(xì)胞

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×10?
貨號(hào) YS-01X8433 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn)    
兔腎足突原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品:大鼠原代腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 Ca Ski(人上皮細(xì)胞) MDA-MB-435S 人癌細(xì)胞 1ml/T75 Hce-8693 人盲腸腺癌細(xì)胞(未分化) A549-luc 人肺癌熒光素酶細(xì)胞 小鼠原代外周血單核細(xì)胞

詳細(xì)介紹

本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:

兔腎足突原代細(xì)胞

方法簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腎足突采用機(jī)械研磨過(guò)不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩結(jié)合膠原酶消化法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腎足突經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品名稱

兔腎足突原代細(xì)胞

組織來(lái)源

英文名稱

Rabbit Renal Podocyte Cells

貨號(hào)

YS-01X8433

產(chǎn)品規(guī)格

5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

用途

僅供科研實(shí)驗(yàn)

 

細(xì)胞簡(jiǎn)介:

兔腎足突細(xì)胞分離自腎組織;腎小球是腎元中的用于將血液過(guò)濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢,被鮑氏囊所包裹,是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動(dòng)脈進(jìn)入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管,匯流入靜脈,而是流入出球小動(dòng)脈。在腎小球內(nèi),微血管受到高壓,而加速了超濾作用(hyperfiltration)的進(jìn)行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后,形成濾液,滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體,腎小球的過(guò)濾速率便稱為腎小球過(guò)濾率。足細(xì)胞(podocyte)即腎小囊臟層上皮細(xì)胞,它附著于腎小球基底膜(GBM)的外側(cè),連同GBM和毛細(xì)血管內(nèi)皮一起構(gòu)成了腎小球血液濾過(guò)屏障。足細(xì)胞特殊的解剖位置,使得其體內(nèi)研究較為困難;又由于正常成年機(jī)體的腎臟足細(xì)胞是一種終末分化細(xì)胞,體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞不能增殖。足細(xì)胞呈星型多突狀,胞體較大,由胞體伸出許多突起,又稱足突(FP),呈指狀交叉復(fù)蓋于GBM外表面,并通過(guò)黏附分子和蛋白多糖分子與GBM相連。足細(xì)胞在正常情況下可以分泌GBM的主要組成成分,IV型膠原和纖維連接蛋白(FN);在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解GBM作用的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)和組織蛋白酶,從而在GBM的代謝平衡中發(fā)揮重要作用。足細(xì)胞之間鄰近的足突相互交替,形成了許多30-40nm的裂孔,孔上覆蓋一層厚4-6nm的裂孔隔膜,即腎小球足突間裂孔隔膜。后者是血漿蛋白通過(guò)脈管系統(tǒng)的后屏障,對(duì)于維持腎小球?yàn)V過(guò)屏障結(jié)構(gòu)與功能完整性發(fā)揮關(guān)鍵作用。

兔腎足突原代細(xì)胞

培養(yǎng)信息:

兔腎足突原代細(xì)胞

包被條件:鼠尾膠原2-5μg/cm2

培養(yǎng)基:含FBS、生長(zhǎng)添加劑、PenicillinStreptomycin

換液頻率:每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性:貼壁

細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣

傳代特性:可傳1-2

消化液:0.25%

培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%

兔腎足突細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

兔腎足突原代細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)方法:

兔腎足突原代細(xì)胞

1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;

③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇:

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;

④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

操作步驟:

兔腎足突原代細(xì)胞
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。

3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。

7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。

10. 封片:將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。

公司產(chǎn)品:兔腎足突原代細(xì)胞


小鼠T淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞;Cyc-Tag(S49)

黃素腺嘌呤二核苷酸抗體

GDP甘露糖焦酸化酶B抗體

淀粉樣肽前體蛋白抗體(C端)

抗利尿激素受體1B抗體

原纖維蛋白2抗體

載脂蛋白A4抗體

黃素腺嘌呤二核苷酸抗體

原纖維蛋白2抗體

淀粉樣肽前體蛋白抗體(C端)

CD40 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CD40 / TNFRSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

ICAM1 Others Human 人 ICAM-1 / CD54 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人肺泡上皮細(xì)胞RNAHPAEpiC miRNA5 μg

FCER1A Others Mouse 小鼠 FcERI / FCER1A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Hong kong/213/03) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

FAIM3 Others Human 人 FAIM3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

LY9 Others Mouse 小鼠 Ly9 / CD229 / SLAMF3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

CM-R125大鼠牙細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

兔腎足突原代細(xì)胞原纖維蛋白2抗體

HAoSMC-c 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HAoSMC) 500,000cells 胰島β細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

CM-H021人前列腺平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

HCT116/L 人結(jié)腸癌耐奧沙耐藥株

SW 1271[SW-1271;SW1271]細(xì)胞,人肺腺癌細(xì)胞 人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞,Caki-1細(xì)胞 人表皮黑色素細(xì)胞-HEM-a

ERBB3 Others Mouse 小鼠 HER3 / ErbB3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

眼睛和頭發(fā)顏色相關(guān)蛋白FUZ抗體

載脂蛋白A4抗體

TNFRSF21 Others Human 人 DR6 / TNFRSF21 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

GDP甘露糖焦酸化酶B抗體

抗利尿激素受體1B抗體

眼睛和頭發(fā)顏色相關(guān)蛋白FUZ抗體

CD40 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CD40 / TNFRSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

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