詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
細胞屬性:
方法簡介
實驗室分離的兔腎臟微血管內(nèi)皮采用膠原酶消化,結合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔腎臟微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔腎臟微血管內(nèi)皮原代細胞 | 組織來源 | 腎 |
英文名稱 | Rabbit Renal Microvascular Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X8432 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介:
兔腎臟微血管內(nèi)皮細胞分離自腎臟;腎臟是兔的重要器官,它的基本功能是生成尿液,借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物,同時經(jīng)重吸收功能保留水分及其他有用物質(zhì),如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等,以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能,生成腎素、促紅細胞生成素、活性D3、前列腺素、激肽等,又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能,保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,使新陳代謝得以正常進行。腎臟內(nèi)部的結構,可分為腎實質(zhì)和腎盂兩部分。在腎縱切面可以看到,腎實質(zhì)分內(nèi)外兩層:外層為皮質(zhì),內(nèi)層為髓質(zhì)。腎皮質(zhì)位于腎實質(zhì)表層,富含血管,新鮮時呈紅褐色,由一百多萬個腎單位組成。每個腎單位由腎小體和腎小管所構成,部分皮質(zhì)伸展至髓質(zhì)錐體間,成為腎柱。腎髓質(zhì)位于腎皮質(zhì)的深面,血管較少,色淡紅,為10-20個錐體所構成。腎錐體在切面上呈三角形。錐體底部向腎凸面,向腎門,錐體主要組織為集合管,錐體稱腎乳頭,每一個乳頭有10-20個乳頭管,向腎小盞漏斗部開口。在腎竇內(nèi)有腎小盞,為漏斗形的膜狀小管,圍繞腎乳頭。腎錐體與腎小盞相連接。每腎有7-8個腎小盞,相鄰2-3個腎小盞合成一個腎大盞。每腎有2-3個腎大盞,腎大盞匯合成扁漏斗狀的腎盂。腎盂出腎門后逐漸縮窄變細,移行為輸尿管。腎單位是腎臟結構和功能的基本單位。腎小體包括腎小球和腎小囊。腎小體內(nèi)有一個毛細血管團,稱為腎小球,腎小球是個血管球。它由腎動脈分支形成。腎小球外有腎小囊包繞。腎小囊分兩層,兩層之間有囊腔與腎小管的管腔相通。腎小管匯成集合管。若干集合管匯合成乳頭管,尿液由此流入腎小盞。微血管又稱毛細血管。分布于各種組織和細胞間的微細的血管。介于微動脈和微靜脈之間。平均直徑7-9微米,數(shù)量極多,成網(wǎng)狀分布。管壁由一層內(nèi)皮細胞及一薄層基膜組成,厚約0.5微米。基膜外面有薄層結締組織,其中有纖維細胞、巨噬細胞和周細胞等。細的毛細血管由一個內(nèi)皮細胞圍成管腔,較粗的毛細血管由2-3個內(nèi)皮細胞圍成。分布于肌肉組織、組織和結締組織中的毛細血管,內(nèi)皮細胞間為縫隙連接(縫隙寬150埃),稱連續(xù)毛細血管;分布于內(nèi)分泌腺、腎臟等處的毛細血管,除有縫隙連接外,細胞本身有許多小孔,(孔徑800-1000埃),稱有孔毛細血管;分布于肝、脾、骨髓及某些內(nèi)分泌腺的毛細血管,管腔擴大,稱血竇。毛細血管的管壁薄、通透性大、管徑細(8-10微米)、數(shù)量多、血流速度慢,這些特點使其成為血液與組織液進行物質(zhì)交換的場所,又稱交換血管。血竇(sinusoid)由毛細血管管腔擴大而成,竇壁的一般結構與毛細血管壁相同,由單層內(nèi)皮細胞構成,內(nèi)皮細胞膜上有窗孔。不同器官的竇壁結構各有差別。脾血竇的內(nèi)皮細胞間有較寬裂隙;肝血竇內(nèi)皮細胞是不連續(xù)的,有較寬的細胞隙(0.1-0.5微米);肝、脾血竇的基膜不完整或無基膜,通透性比毛細血管大,較大的蛋白質(zhì)和血細胞可以通過。肝血竇壁內(nèi)有枯否細胞,脾血竇內(nèi)外有巨噬細胞,這兩種細胞都有吞噬能力,可吞噬清除血液中的異物、細菌等有害物質(zhì),是機體單核巨噬細胞系統(tǒng)的重要組成分。某些內(nèi)分泌腺的血竇有連續(xù)的基膜。
培養(yǎng)信息:
包被條件:PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養(yǎng)基:含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):內(nèi)皮細胞樣
傳代特性:可傳2-3代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔腎臟微血管內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品:
小鼠肺腺癌細胞系;LA795 小鼠食管平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL | 酸化細胞信號轉導分子Smad-1/5抗體 |
酸化活化蛋白激酶D抗體 | 樁蛋白Paxillin抗體 |
腫瘤轉移抑制基因GDIA2抗體 | 酸化三酸腺苷依賴解旋酶DDX3抗體 |
轉化因子樣蛋白4抗體 | 酸化細胞信號轉導分子Smad-1/5抗體 |
酸化三酸腺苷依賴解旋酶DDX3抗體 | 樁蛋白Paxillin抗體 |
小鼠成纖維細胞(EGFP標記) Mouse | 小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A4 |
TE-11細胞,食管癌細胞 人食管癌細胞,CaEs-17細胞 大鼠胰腺外分泌腺細胞;AR42J | 小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B2 |
人葡萄膜黑色素細胞;UM | 人胚肺成纖維細胞;MRC-5 |
CM-R088大鼠破骨細胞培養(yǎng)基100mL | CL-0168Neuro-2a/N2a(小鼠腦瘤細胞)5×106cells/瓶×2 |
犬腎細胞系/野生型;MDCK/wild Mo-MuLv感染的3T3細胞,Mo-MuLv/3T3細胞 LA795細胞,小鼠肺腺癌細胞系 | 兔腎臟微血管內(nèi)皮原代細胞酸化三酸腺苷依賴解旋酶DDX3抗體 |
肺大靜脈平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | Lncap細胞,前列腺癌細胞 膀胱變移細胞癌細胞,T-24細胞 人胚腎細胞;293 Cells, low passage |
SEMA4D Others Mouse 小鼠 Semaphorin-4D / SEMA4D / CD100 人細胞裂解液 (陽性對照) | 豬腎傳代細胞;IBRS-2 |
Hep G2 人肝癌細胞 | 酸化轉化生長因子β活化激酶結合蛋白1抗體 |
轉化因子樣蛋白4抗體 | 人元RNAHN miRNA5 μg |
酸化活化蛋白激酶D抗體 | 腫瘤轉移抑制基因GDIA2抗體 |
酸化轉化生長因子β活化激酶結合蛋白1抗體 | 小鼠成纖維細胞(EGFP標記) Mouse |