詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
細胞屬性:
方法簡介
實驗室分離的兔腎小球上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔腎小球上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔腎小球上皮原代細胞 | 組織來源 | 腎 |
英文名稱 | Rabbit Glomerular Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X8430 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介:
兔腎小球上皮細胞分離自腎組織;腎臟是機體的重要器官,它的基本功能是生成尿液,借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物,同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì),如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等,以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能,生成腎素、促紅細胞生成素、活性D3、前列腺素、激肽等,又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能,保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,使新陳代謝得以正常進行。腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢,被鮑氏囊所包裹,是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動脈進入腎小球。腎小球上皮細胞是由間充質(zhì)細胞分化發(fā)育、襯貼于腎小球血管腔的單層扁平上皮細胞,是腎小球的固有細胞之一,也是構(gòu)成腎小球濾過膜的重要組成部分。腎小球上皮細胞的正常結(jié)構(gòu)和功能是腎單位濾過及腎小球微環(huán)境穩(wěn)定的重要保障。腎小球濾過膜的外層為上皮細胞層,厚約40nm,腎小球上皮細胞是腎小囊的臟層上皮細胞,貼附于腎小球血管外側(cè)基底膜上。上皮細胞又稱足細胞,足細胞的不規(guī)則突起為足突,其間有許多狹小間隙,血液經(jīng)濾過膜過濾入腎小球囊。腎小球上皮細胞可通過合成和分泌腎上腺髓質(zhì)肽抑制系膜細胞增殖,腎上腺髓質(zhì)肽作為一種重要的旁分泌因子,可保持腎小球微環(huán)境穩(wěn)定,并參與腎小球的炎癥過程。體外培養(yǎng)的腎小球上皮細胞對各型腎小球腎炎具有重要的研究價值。
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):上皮細胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔腎小球上皮細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品:
小鼠成肌細胞;C2C12 | 椎骨蛋白2抗體 |
葡萄糖6-酸脫氨酶1抗體 | 腺苷酸環(huán)化酶2抗體 |
α增強子結(jié)合蛋白1抗體 | 纖維蛋白原A鏈抗體 |
腺苷酸環(huán)化酶3抗體 | 椎骨蛋白2抗體 |
纖維蛋白原A鏈抗體 | 腺苷酸環(huán)化酶2抗體 |
CD96 Others Mouse 小鼠 CD96 人細胞裂解液 (陽性對照) | CD244 Others Human 人 2B4 / SLAMF / CD244 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人肺微血管內(nèi)皮細胞HPMEC | CASK Others Human 人 CASK Kinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
Saos-2(人骨肉瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 人 Ephrin-A4 / EFNA4 人細胞裂解液 (陽性對照) | RK1 Others Mouse 小鼠 kA / RK1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
hCD133+-CB-c pooled 從臍帶血提取的人類CD133+祖細胞(hCD134+-CB),混合來源 100000 大鼠腹脊髓元RN-vsc | NCI-H1755[H1755]細胞,人肺癌細胞 人胚肺成纖維細胞,HELF細胞 卵巢上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) |
CSC, 小鼠心肌細胞 | 兔腎小球上皮原代細胞纖維蛋白原A鏈抗體 |
豚鼠皮膚細胞;GP-S2 恒河猴腎細胞,LLC-MK2細胞 WEHI-3細胞,小鼠血細胞 | 人類成纖維細胞系;CNLMG-B5537SKIN |
人臍帶單核細胞培養(yǎng)基 100mL | RETN Others Mouse 小鼠 Resistin / ADSF / RETN 人細胞裂解液 (陽性對照) |
大鼠腹部脊髓元(RVSCI)(1×106) HNE2, 人鼻咽癌細胞系 Human | 叉頭蛋白F1抗體 |
腺苷酸環(huán)化酶3抗體 | 3T3NIH細胞,小鼠成纖維細胞 HUVEC(人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞) 小鼠垂體瘤細胞;GT1-1 |
葡萄糖6-酸脫氨酶1抗體 | α增強子結(jié)合蛋白1抗體 |
叉頭蛋白F1抗體 | CD96 Others Mouse 小鼠 CD96 人細胞裂解液 (陽性對照) |