詳細介紹
兔腎動脈平滑肌原代細胞
兔腎動脈平滑肌細胞分離自腎動脈組織;腎動脈的分支為葉間動脈,穿行于腎柱內(nèi),上行至皮質(zhì)與髓質(zhì)交界處,形成與腎表面平行的弓狀動脈。小葉間動脈向被膜發(fā)出毛細血管,并向周圍的腎小體發(fā)出入球小動脈,進入腎小囊后形成球形的毛細血管網(wǎng),再匯集成出球小動脈,出腎小體。直小動脈分支形成毛細血管網(wǎng),再匯合成直小靜脈,入弓狀靜脈、葉間靜脈,后匯合成腎靜脈經(jīng)腎門出腎,注入下腔靜脈。腎動脈既是腎的營養(yǎng)血管,又是腎的機能血管,與腎泌尿機能密切相關(guān)。腎動脈在腎實質(zhì)內(nèi)形成兩個毛細血管網(wǎng):腎小球毛細血管網(wǎng),血壓較高,利于血漿濾過形成原尿;球后毛細血管網(wǎng),血壓較低,利于腎小管的重吸收。腎動脈平滑肌細胞是腎動脈的重要結(jié)構(gòu)細胞之一,在機體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。腎動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數(shù)細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網(wǎng)狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。
英文名稱 | Rabbit Renal Artery Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 腎動脈 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8427 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:兔腎動脈平滑肌細胞
組織來源:腎動脈
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔腎動脈平滑肌細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的兔腎動脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔腎動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
小鼠成纖維細胞;φ2 | CD349抗體 |
G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白α14/Gα 14 抗體 | 酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體 |
蛋白激酶A錨定蛋白7抗體 | 凋亡調(diào)節(jié)蛋白δ+γ抗體 |
腺苷酸活化蛋白激酶γ1抗體 | CD349抗體 |
凋亡調(diào)節(jié)蛋白δ+γ抗體 | 酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體 |
TNFRSF17 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 TNFRSF17 / BCMA 人細胞裂解液 (陽性對照) | CD86 Others Mouse 小鼠 CD86 / B7-2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人肺細胞;HLF-a | GFRA1 Others Canine 狗 GFRA1 / GFR alpha-1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
FGFR1 Others Mouse 小鼠 FGFR1 / CD331 人細胞裂解液 (陽性對照) | TLR2 Others Mouse 小鼠 TLR2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
人心臟成纖維細胞( HCF) ( 5×105 ) GC-1, 鼠精原細胞 Mouse | marc-145猴胚胎腎上皮細胞 Marc-145 monkey embryonic kidney epithelial cells DMEM+10% FBS |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞(拉祜族);KM9406 | 兔腎動脈平滑肌原代細胞凋亡調(diào)節(jié)蛋白δ+γ抗體 |
COS-1非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細胞 Renal cell COS-1 in African green monkey SV40 ansformation DMEM培養(yǎng)基+10%FBS | 人口腔角質(zhì)細胞裂解物HOKL |
CL-0115Hs 746T(人胃癌細胞)5×106cells/瓶×2 | TNFSF11 Others Human 人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CSF2 Others Human 人 GM-CSF / CSF2 人細胞裂解液 (陽性對照) | 纖維蛋白原γ鏈抗體 |
腺苷酸活化蛋白激酶γ1抗體 | 小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-C2 II型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL |
G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白α14/Gα 14 抗體 | 蛋白激酶A錨定蛋白7抗體 |
纖維蛋白原γ鏈抗體 | TNFRSF17 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 TNFRSF17 / BCMA 人細胞裂解液 (陽性對照) |
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。