詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腎成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腎成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔腎成纖維原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 腎 |
英文名稱 | Rabbit Renal Fibroblast Cells | 貨號(hào) | YS-01X8425 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
兔腎成纖維細(xì)胞分離自腎組織;腎臟是機(jī)體的重要器官,它的基本功能是生成尿液,借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物,同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì),如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等,以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能,生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性D3、前列腺素、激肽等,又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場(chǎng)所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能,保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,使新陳代謝得以正常進(jìn)行。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損以及骨創(chuàng)傷的修復(fù)有著十分重要的作用。腎成纖維細(xì)胞是腎臟結(jié)締組織中重要的細(xì)胞類型,在體外培養(yǎng)中,一般大致成梭形、多角形或不規(guī)則形等,為貼壁生長(zhǎng)型細(xì)胞。剛分離的腎成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長(zhǎng),不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長(zhǎng),平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。其主要功能有:①組成過(guò)濾屏障內(nèi)壁的重要部分;②在炎癥和致血栓物質(zhì)的刺激合成必要的生物活性分子;③受損后影響系膜細(xì)胞和上皮細(xì)胞,進(jìn)而影響腎臟病變。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔腎成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
操作步驟:
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品:
小鼠垂體瘤細(xì)胞(分泌促生長(zhǎng)激素分泌激素);AtT-20 | FAM家族蛋白40A抗體 |
G蛋白β樣蛋白抗體 | 自噬相關(guān)蛋白16A抗體 |
激活素受體相互作用蛋白1抗體 | 粒體裂變1蛋白抗體 |
芳香胺N-乙酰化轉(zhuǎn)移酶抗體 | FAM家族蛋白40A抗體 |
粒體裂變1蛋白抗體 | 自噬相關(guān)蛋白16A抗體 |
ICOS Others Mouse 小鼠 ICOS / AILIM / CD278 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 人脂肪細(xì)胞-皮下(HPA-s)(1×106 ) Raji,人Butt's淋巴瘤細(xì)胞 Human |
人肺腺癌細(xì)胞;Calu-3 | CSF1R Others Human 人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人胚肺成纖維細(xì)胞;HFL-I 人臍帶單核細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 大鼠垂體細(xì)胞(RPC)(1×106) |
CD200 Others Human 人 CD200 / OX-2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | RK1(大鼠腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 786-0(腎透明細(xì)胞腺癌) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(拉祜族);KM9406 | 兔腎成纖維原代細(xì)胞粒體裂變1蛋白抗體 |
IR983F(大鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 多形擬桿菌 | BRL-3A 大鼠正常肝細(xì)胞 |
HCT-8/V? 人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株 | PC-3M細(xì)胞,人前列腺癌細(xì)胞 兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,CCC-SMC-2細(xì)胞 人真皮成纖維母細(xì)胞-HDF-a |
大鼠中腦縫細(xì)胞(腦脊)(RNr)(1×106) | 纖維蛋白肽B抗體(血纖肽B) |
芳香胺N-乙?;D(zhuǎn)移酶抗體 | IL12RB1 Others Human 人 IL12RB1 / IL12RB / CD212 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
G蛋白β樣蛋白抗體 | 激活素受體相互作用蛋白1抗體 |
纖維蛋白肽B抗體(血纖肽B) | ICOS Others Mouse 小鼠 ICOS / AILIM / CD278 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |