詳細(xì)介紹
兔神經(jīng)小膠質(zhì)原代細(xì)胞
兔小膠質(zhì)細(xì)胞分離自腦組織;大腦分左右兩個(gè)半球,大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分,它是元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個(gè)半球都有三個(gè)面,即外側(cè)面(約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3)、內(nèi)側(cè)面和底面(占2/3的面積);半球表面有很多深淺不等的溝或裂,溝或裂之間的隆起叫回,它們大大增加了大腦的表面積;大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔,使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。小膠質(zhì)細(xì)胞是膠質(zhì)細(xì)胞的一種,相當(dāng)于腦和脊髓中的巨噬細(xì)胞,是中樞系統(tǒng)(CNS)中的第一道也是主要的一道免疫防線。小膠質(zhì)細(xì)胞大約占大腦中的膠質(zhì)細(xì)胞的20%,小膠質(zhì)細(xì)胞不停地清除著中樞系統(tǒng)中的損壞的,斑塊及感染性物質(zhì)。無(wú)數(shù)臨床上和病理學(xué)研究表明激活的小膠質(zhì)細(xì)胞在退化類(lèi)疾病的發(fā)病機(jī)理中起到十分重要的作用,如帕金森病、多發(fā)性硬化和阿茲海默癥等。但是過(guò)多激活或失控的小膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)引起毒性。它們是促炎因子和氧化應(yīng)激的重要來(lái)源,如腫瘤壞死因子(TNF),一氧化氮,白介素等有毒性的物質(zhì)。小膠質(zhì)細(xì)胞的主要功能:①膠質(zhì)出現(xiàn)在大腦發(fā)育早期向成熟階段轉(zhuǎn)化的過(guò)程中;②當(dāng)程序性細(xì)胞死亡時(shí),或在大腦發(fā)育的過(guò)程中,中樞系統(tǒng)受損或受到病理?yè)p壞時(shí),膠質(zhì)可做為大腦的巨噬細(xì)胞;③膠質(zhì)細(xì)胞能在Ⅱ類(lèi)組織相容性復(fù)合體表達(dá)CD-4陽(yáng)性T細(xì)胞時(shí)表達(dá)抗原,能進(jìn)行Fc介導(dǎo)的巨噬作用,并且與造血細(xì)胞和巨噬細(xì)胞組織共享抗原。
英文名稱(chēng) | Rabbit Microglia Cells | 組織來(lái)源 | 腦 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8423 |
細(xì)胞形態(tài) | 梭形、多角形 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱(chēng):兔神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞
組織來(lái)源:腦
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基:含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):梭形、多角形
傳代特性:屬于終末分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群
消化液:(12mM)
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔小膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔小膠質(zhì)采用酶消化法結(jié)合差速貼壁法,在培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)缺失數(shù)天后經(jīng)搖床震蕩收集脫落細(xì)胞制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔小膠質(zhì)經(jīng)CD11b免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
小鼠垂體瘤細(xì)胞;GT1-1 | FAM55D蛋白抗體 |
G蛋白β5/Gβ 5 抗體 | 酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體 |
蛋白激酶AKT1,2,3抗體 | Fas活化激酶結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 |
腺苷酸環(huán)化酶8抗體 | FAM55D蛋白抗體 |
Fas活化激酶結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 | 酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體 |
BTC Others Human 人 BTC / Betacellulin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | IL2RA Others Mouse 小鼠 IL2RA / CD25 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人肺腺癌細(xì)胞;Calu-3 | PRLR Others Rat 大鼠 PRLR / Prolactin receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人臍帶間葉干細(xì)胞(臍帶)(HUMSC) (5×105) AGS人胃腺癌細(xì)胞 Human | MYOC Others Human 人 MYOC / Myocilin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
EDA2R Others Human 人 EDA2R / XEDAR / TNFRSF27 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CD84 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD84 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(彝族);HYL | 兔神經(jīng)小膠質(zhì)原代細(xì)胞Fas活化激酶結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 |
CDC37 Others Human 人 CDC37 / CDC37A 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 人絨毛間充質(zhì)成纖維細(xì)胞 |
犬胸腺細(xì)胞;cf2Th | hMo-PB single 人類(lèi)外周血單核細(xì)胞團(tuán)塊單一來(lái)源,預(yù)選型 > 1 mio.cells 人表皮黑色素細(xì)胞-中色素RNAHEM-m miRNA5 μg |
正常小鼠Leydig細(xì)胞;TM3 小鼠子宮頸上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 肝細(xì)胞核因子3抗體 |
腺苷酸環(huán)化酶8抗體 | NPC2 Others Human 人 Niemann-Pick disease type C2 / NPC2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
G蛋白β5/Gβ 5 抗體 | 蛋白激酶AKT1,2,3抗體 |
肝細(xì)胞核因子3抗體 | BTC Others Human 人 BTC / Betacellulin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi);
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。