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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔臍動脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔臍動脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔臍動脈內(nèi)皮原代細胞 | 組織來源 | 臍帶 |
英文名稱 | Rabbit Umbilical Artery Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X8411 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔臍動脈內(nèi)皮細胞分離自臍帶組織；它是臍動脈的重要結(jié)構(gòu)組成細胞之一，在機體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu)，臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈，卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。在子宮中，子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管，與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近，在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2，代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營養(yǎng)物質(zhì)的交換。臍動脈將胎兒產(chǎn)生的廢物運送至胎盤，臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運送給胎兒。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔臍動脈內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
小鼠肝癌細胞;Hepa 1-6 [Hepa1-6] | FAM150A蛋白抗體 |
高爾基體膜相關(guān)蛋白7抗體 | 自噬相關(guān)蛋白4D抗體 |
膜粘連蛋白2受體抗體 | FLAG Tag標簽抗體（N端） |
芳香乙脫乙?；笜拥鞍?span>2抗體 | FAM150A蛋白抗體 |
FLAG Tag標簽抗體（N端） | 自噬相關(guān)蛋白4D抗體 |
CX3CL1 Others Canine 狗 Fractalkine / CX3CL1 人細胞裂解液 (陽性對照) | BGC-803(人胃癌細胞) 5×106cells/瓶×2 轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠支持細胞;15P-1 |
人肝內(nèi)膽管上皮細胞HIBEpiC | SIRPA Others Rat 大鼠 SIRP alpha / CD172a 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人肝間充質(zhì)干細胞(肝)(HMSC-HE)(5×105) HGC-27人胃癌細胞 Human | 人齒根膜韌帶成纖維細胞(HPDLF)( 5×105 ) |
CD14 Others Mouse 小鼠 CD14 人細胞裂解液 (陽性對照) | RKO-AS45-1(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞) 5×106cells/瓶×2 6T-CEM(T細胞白血病) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KM9402 | 兔臍動脈內(nèi)皮原代細胞FLAG Tag標簽抗體（N端） |
J774A.1(小鼠單核巨噬細胞) 5×106cells/瓶×2 空腸彎曲桿菌 | 人肝動脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基 100mL |
CCL16 Protein Human 重組人 CCL16 / HCC-4 / NCC4 蛋白 (His 標簽) | Ana-1小鼠巨噬細胞 Mouse macrophage Ana-1 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS |
CD302 Others Mouse 小鼠 CD302 / CLEC13A 人細胞裂解液 (陽性對照) | FXYD離子轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)因子7抗體 |
芳香乙脫乙酰基酶樣蛋白2抗體 | TNFRSF1B Others Human 人 TNFRSF1B / TNFR2 / CD120b 人細胞裂解液 (陽性對照) |
高爾基體膜相關(guān)蛋白7抗體 | 膜粘連蛋白2受體抗體 |
FXYD離子轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)因子7抗體 | CX3CL1 Others Canine 狗 Fractalkine / CX3CL1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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