詳細(xì)介紹
兔脊髓成纖維原代細(xì)胞
兔脊髓成纖維細(xì)胞分離自脊髓組織;脊髓是細(xì)細(xì)的管束狀的結(jié)構(gòu),位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護(hù);是源自腦的中樞系統(tǒng)延伸部分。中樞系統(tǒng)的細(xì)胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的信息。人和脊椎動(dòng)物中樞系統(tǒng)的一部分,在椎管里面,上端連接延髓,兩旁發(fā)出成對的,分布到四肢、體壁和內(nèi)臟。脊髓的內(nèi)部有一個(gè)H形(蝴蝶型)灰質(zhì)區(qū),主要由細(xì)胞構(gòu)成;在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū),主要由有髓纖維組成;脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發(fā)出許多成對的(稱為脊)分布到全身皮膚、肌肉和內(nèi)臟器官。脊髓是周圍與腦之間的通路,也是許多簡單反射活動(dòng)的低級中樞。按脊的出入可把脊髓也分為相應(yīng)的31節(jié),31對脊就是由不同的脊椎發(fā)出的。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來;成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的脊髓成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。脊髓成纖維細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的主要功能包括:構(gòu)造和維持組織的正常形態(tài);合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì);組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織。
英文名稱 | Rabbit Spinal Cord Fibroblast Cells | 組織來源 | 脊髓 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8368 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:兔脊髓成纖維細(xì)胞
組織來源:脊髓
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔脊髓成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔脊髓成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的兔脊髓成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(來自NIH3T3);PA12 | 酸化成纖維細(xì)胞生長因子受體底物2抗體 |
鳥苷酸環(huán)化酶α1/GCS-α-1抗體 | 酸化A-Raf抗體 |
水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體 | 腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 |
Rho鳥苷酸交換因子2抗體 | 酸化成纖維細(xì)胞生長因子受體底物2抗體 |
腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 | 酸化A-Raf抗體 |
GGT1 Others Rat 大鼠 GGT1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | NHEK.f-c 正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞(NHEK)少年,單一來源 500,000cells 原代膠質(zhì)細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml |
人海馬趾細(xì)胞cDNAHN-h cDNA | PRKAR1A Others Human 人 PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
BMP5 Others Human 人 BMP-5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CD3D Others Human 人 CD3d / CD3 delta 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
TNFRSF21 Others Human 人 DR6 / TNFRSF21 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | HPAC細(xì)胞,人胰腺癌細(xì)胞 人支氣管上皮細(xì)胞,16HBE細(xì)胞 皮膚肥大細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMYB | 兔脊髓成纖維原代細(xì)胞腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 |
MM96L細(xì)胞,黑色素瘤細(xì)胞 人急性成髓細(xì)胞白血病,Kasumi-1細(xì)胞 人導(dǎo)管瘤細(xì)胞;BT-474 | 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HT-29 |
人胚肺細(xì)胞VA13細(xì)胞;WI-38 VA13亞系2RA | ANGPTL2 Others Mouse 小鼠 ANGPTL2 / Angiopoietin-like 2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
NCI-H2227(人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 FRhK-4(恒河猴胚腎細(xì)胞) | 卵泡刺激素結(jié)合蛋白1抗體 |
Rho鳥苷酸交換因子2抗體 | SRSV/3T3細(xì)胞,SRSV轉(zhuǎn)化的3T3細(xì)胞 人胰腺癌細(xì)胞,SW1990細(xì)胞 CM-M032小鼠腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
鳥苷酸環(huán)化酶α1/GCS-α-1抗體 | 水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體 |
卵泡刺激素結(jié)合蛋白1抗體 | GGT1 Others Rat 大鼠 GGT1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |