詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
細胞屬性:
方法簡介
實驗室分離的兔睪丸支持采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔睪丸支持經(jīng)Fas-L免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔睪丸支持原代細胞 | 組織來源 | 睪丸 |
英文名稱 | Rabbit Sertoli Cells | 貨號 | YS-01X7858 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介:
兔睪丸支持細胞分離自睪丸;睪丸支持細胞又稱Sertoli細胞,在體內(nèi)呈不規(guī)則的高錐體形,細胞基部附著在基膜上,頂部伸至曲精小管腔面。它是生精細胞的支架,為其提供必需的營養(yǎng)物質(zhì),能合成與分泌雄激素結(jié)合蛋白,為其提供高濃度的雄激素環(huán)境等,還具有構(gòu)成血-睪屏障,形成睪丸內(nèi)微環(huán)境,調(diào)節(jié)發(fā)生等功能。睪丸支持細胞是睪丸的主要組成細胞,能分泌多種生長因子和免疫抑制因子,不僅可為提供營養(yǎng)支持和免疫保護,也能對其他細胞,如胰島和細胞提供營養(yǎng)支持,而且當其與胰島或細胞共移植時,也能夠為這些細胞提供免疫保護,提高植活率。因此,睪丸支持細胞在細胞移植中具有廣泛的應(yīng)用前景。制備高活率的Sertoli不僅對Sertoli的基礎(chǔ)研究有重要價值,而且在發(fā)生等領(lǐng)域有重要意義。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳2-3代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔睪丸支持細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品:
TE-10細胞,人食管癌細胞 人腦膠質(zhì)母細胞瘤細胞,TG-905細胞 家貓皮膚細胞;FCA-S1 | Rhesus antibody Rh GDF9 生長分化因子9抗體 規(guī)格 0.1ml |
HP-CagA-IgG(Human Helicobacter pylori cytotoxin-associated gene A protein IgG) ELISA Kit 人幽門螺桿菌細胞毒素相關(guān)基因蛋白A-IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 48T | IgG/Cy7 Cy7標記的小鼠抗IgG 0.1ml |
phospho-IKKi(Thr501): 0酸化核因子NFκB抑制蛋白激酶i抗體 0.1ml | NSE ELISA Kit 大鼠特異性烯醇化酶 96T |
Rhesus antibody Rh Reprimo 細胞質(zhì)內(nèi)的糖基化蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-Leptin/FITC 熒光素標記瘦素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-Stathmin(Ser25) 0酸化原癌基因蛋白18 規(guī)格 0.1ml | P-cad(Human Placenta Cadherin) ELISA Kit 人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白 96T |
Calu-1(人肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 | CM-R072大鼠腎管狀上皮細胞培養(yǎng)基100mL |
小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞;SH2 小鼠腸粘膜上皮細胞培養(yǎng)基 100mL | MN-c, 小鼠皮質(zhì)元 Mouse |
人羊膜細胞;WISH | 人胚肺二倍體細胞;KMB-17 |
CM-M037小鼠小腸隱窩上皮細胞培養(yǎng)基100mL | 人腸平滑肌細胞裂解物HISMCL |
犬胸腺細胞;cf2Th SRSV轉(zhuǎn)化的3T3細胞,SRSV/3T3細胞 CCC-Ca761-03細胞,小鼠癌細胞 | 兔睪丸支持原代細胞NSE ELISA Kit 大鼠特異性烯醇化酶 96T |
CL-0201S-180(小鼠肉瘤細胞)5×106cells/瓶×2 | QGY-7701(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠 EphA3 人細胞裂解液 (陽性對照) |
GFRA1 Others Rat 大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 人細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H097人椎間盤髓核細胞培養(yǎng)基100mL |
人胚肺成纖維細胞;MRC-5 | Rhesus antibody Rh APC5 細胞分裂周期蛋白5抗體 規(guī)格 0.2ml |
phospho-Bax (Thr167): 0酸化Bax抗體 0.1ml | HFL1 人肺成纖維細胞 |
Anti-TPH /FITC 熒光素標記色羥化酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | PROK2: 前動力蛋白2抗體 0.2ml |
Anti-CDK4/FITC 熒光素標記周期素依賴性激酶4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | Calu-1(人肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |