詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔肝枯否采用混合酶灌流消化、低速離心、密度梯度離心、差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔肝枯否經(jīng)CD68免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔肝枯否原代細(xì)胞 | 組織來源 | 肝臟 |
英文名稱 | Rabbit Kupffer Cells | 貨號(hào) | YS-01X8351 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
兔枯否細(xì)胞分離自肝臟組織;肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官,并在身體里面起著去氧化、儲(chǔ)存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用;肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里大的器官,位于機(jī)體中的腹部位置,在右側(cè)橫隔膜之下,位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中大的消化腺,為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官,又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu):肝臟位于右上腹,隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面,大部分肝為肋弓所復(fù)蓋,僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,肝上面則與膈及腹前壁相接??莘袷霞?xì)胞(Kupffer細(xì)胞)是肝臟的肝血竇內(nèi)一些固定于竇壁的巨噬細(xì)胞,它能吞噬和清除大部分從腸道來的抗原微粒,并能吞噬和清除肝血竇中的細(xì)菌、異物和衰老的紅細(xì)胞,并把血紅蛋白分解成。此外,肝巨噬細(xì)胞也有處理抗原,誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖,參與免疫調(diào)節(jié)的作用??莘袷霞?xì)胞和一般巨噬細(xì)胞不同,枯否氏細(xì)胞不具有增加抗原免疫原性的能力,相反有消除或減弱抗原性的作用。枯否氏細(xì)胞能吞噬來自血液循環(huán)的抗原抗體復(fù)合物和其他有害物質(zhì),以消除這些物質(zhì)對(duì)機(jī)體的損害??莘窦?xì)胞功能障礙可導(dǎo)致腸源性內(nèi)毒素血癥。電鏡下有很多皺褶和微絨毛。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):梭形、巨噬細(xì)胞
傳代特性:屬于終末分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群
消化液:(12mM)
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔肝枯否細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品:
小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞MOPC | eNOS: 合成酶-3(內(nèi)皮型)抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh MAX protein Myc基因相關(guān)X因子抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-TSH/Biotin 化促甲狀腺素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
TSFP1/SP1(transcription factor Sp1) SP1轉(zhuǎn)錄生長(zhǎng)因子抗原 0.5mg | Anti-P21/CDKN1A p21蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml |
Anti-Gastrin/FITC 熒光素標(biāo)記胃泌素/蛙皮素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLAMF9/CD2F-10 CD2F-10抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-ER- Alpha(phospho-Tyr537)/FITC 熒光素標(biāo)記抗大、小鼠0酸化雌激素受體α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | Anti-ATG7/FITC 熒光素標(biāo)記自噬相關(guān)蛋白7抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
LGMN Others Sus scrofa (Pig) 野豬 (Pig) Legumain / LGMN / AEP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 人脂肪細(xì)胞-內(nèi)臟(HPA-v)(1×106 ) MDA-MB-231(ATCC來源), 人癌細(xì)胞 Human |
人急性淋巴母細(xì)胞性白血病細(xì)胞;MOLT-4 | FGFR1 Others Human 人 FGFR1 / CD331 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
HA Others H9N2 甲型流感 H9N2 (A/Guinea fowl/Hong Kong/WF10/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | IL17RA Others Mouse 小鼠 IL17RA / IL17R / CD217 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
NRK-52E(大鼠腎小管導(dǎo)管上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 APCDD1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | HGF Others Human 人 HGF / Hepatocyte Growth Factor CHO細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
HL-60, 人早幼粒白血病細(xì)胞 | 兔肝枯否原代細(xì)胞Anti-P21/CDKN1A p21蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml |
SEMA4D Others Rat 大鼠 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-1 |
前列腺癌組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)/1ml | ACHN(人腎癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R043大鼠小腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL 人胚肺二倍體細(xì)胞;HEL-1 |
SNU-739人肝癌細(xì)胞 SNU-739 human hepatocarcinoma cells DMEM+10% FBS | GIMAP5: GTP酶IMAP家族成員5抗體 0.2ml |
Human platelet activating factor,PAF ELISA Kit 人血小板活化因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T | IL5 Others Mouse 小鼠 IL5 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
核小體結(jié)合蛋白1抗體 Anti-NSBP1 0.2ml | HGV-IgM(Human Hepatitis G virus IgG) ELISA Kit 人庚型肝炎病毒IgM 96T |
phospho-AMPK beta 1 (Ser108): 0酸化腺苷單0酸活化蛋白激酶β1抗體 0.1ml | LGMN Others Sus scrofa (Pig) 野豬 (Pig) Legumain / LGMN / AEP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。