詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
細胞屬性:
方法簡介
實驗室分離的兔腹膜間皮采用混合膠原酶消化法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔腹膜間皮經(jīng)PCK、Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔腹膜間皮原代細胞 | 組織來源 | 腹膜 |
英文名稱 | Rabbit Peritoneal Mesothelial Cells | 貨號 | YS-01X8346 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介:
兔腹膜間皮細胞分離自腹膜組織;腹膜是存在于高等脊椎動物腹腔中的一層黏膜,主要由間皮細胞構(gòu)成,藉由結(jié)締組織的支持所形成的一層膜狀組織。腹膜包覆大部分腹腔內(nèi)的器官,能分泌黏液潤濕臟器的表面,減輕臟器間的摩擦。腹腔臟器的血液、淋巴和組織經(jīng)由腹膜與外界相連;腹膜也具有吸收撞擊保護內(nèi)臟的效果。腹膜(peritoneum)為全身面積大、配布復(fù)雜的漿膜,由皮及少量結(jié)締組織構(gòu)成,薄而光滑,呈半透明狀。襯于腹、盆腔壁內(nèi)表面的腹膜稱為壁腹膜(parietal-peritoneum)或腹壁薄層;覆蓋腹、盆腔器表面的部分稱為臟腹膜(visceral-peritoneum)腹膜或腹膜臟層。臟腹膜與壁腹膜互相延續(xù)、移行,共同圍成不規(guī)則的潛在性腔隙,稱為腹膜腔(peritoneal-cavity)。腹膜腔是臟、壁兩層腹膜之間相互移行圍成的潛在性間隙。腹膜腔內(nèi)有少量漿液,在臟器活動時可減少摩擦。腹膜間皮細胞屬于上皮組織中的單層扁平上皮,是覆蓋于腹膜表面的一層細胞。間皮細胞是構(gòu)成間皮的細胞,正常大小約為15-25微米,細胞常呈圓形或者卵圓形。其功用是提供潤滑,使器官與器官、器官與胸膜與腹膜間都能得到良好的保護,不會互相磨損受傷。而間皮所生產(chǎn)的潤滑和保護作用就是靠間皮細胞所分泌的物質(zhì)來達成,分泌物多半為細胞外基質(zhì)、玻尿酸類物質(zhì)。
培養(yǎng)信息:
包被條件:PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔腹膜間皮細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品:
SF767細胞,人腦瘤細胞 陰溝腸桿菌 人主動脈內(nèi)皮細胞總RNAHAEC NA | Rhesus antibody Rh GDIA2/ARHGDIB 轉(zhuǎn)移抑制基因GDIA2抗體 規(guī)格 0.1ml |
AACT(Human Alpha1 Antichymotrypsin) ELISA Kit 人α1抗胰白酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T | IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標記的小鼠抗IgG 0.1ml |
IRX5: Iroquois同源蛋白5抗體 0.2ml | anti-DNase B(Human anti-deoxyribonuclease B) ELISA Kit 人抗DNA酶B抗體 96T |
Rhesus antibody Rh RERG Ras相關(guān)雌激素調(diào)節(jié)生長抑制蛋白 規(guī)格 0.2ml | Anti-LDL/FITC 熒光素標記低密度脂蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
Rhesus antibody Rh phospho-STXBP1(Ser515) 0酸化突觸前膜胞內(nèi)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | AChE ELISA Kit 大鼠乙酰酯酶 96T |
RKO-E6(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞) 5×106cells/瓶×2 | 犬腎細胞;MDCK(NBL-2) |
801-D細胞,人巨細胞性肺癌細胞 轉(zhuǎn)入Tet-off調(diào)控,含EGFP基因的CHO細胞,CHO-AA8細胞 CM-M026小鼠骨髓基質(zhì)細胞培養(yǎng)基100mL | Sf-21(昆蟲細胞) 5×106cells/瓶×2 |
人正常肺上皮細胞;BEAS-2B | CW-2(人結(jié)腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
U-87 MG人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤 U-87 MG of brain asocytic blastoma DMEM+10% FBS | 人牙周膜成纖維細胞裂解物HPLFL |
769-P細胞,人腎癌細胞系(769-P) 中國倉鼠倉鼠肺細胞,R1610細胞 CL-0406NCI-H838(人非小細胞肺癌細胞)5×106cells/瓶×2 | 兔腹膜間皮原代細胞anti-DNase B(Human anti-deoxyribonuclease B) ELISA Kit 人抗DNA酶B抗體 96T |
眼晶狀體上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | EPHA6 Others Mouse 小鼠 EphA6 / EHK-2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
MAP4K5 Others Human 人 MAP4K5 / MEKKK5 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H093人顱蓋造骨細胞培養(yǎng)基100mL |
IFNG Protein Human 重組人 IFN-gamma / IFNG / γ-IFN 蛋白 | Rhesus antibody Rh APC70/CRSP70 轉(zhuǎn)錄激活蛋白crsp70抗體 規(guī)格 0.2ml |
phospho-BCAR1 (Tyr249): 0酸化癌抗雌激素耐藥蛋白1抗體 0.1ml | CM-R016大鼠胰腺星狀細胞培養(yǎng)基100mL |
Anti-TRADD/FITC 熒光素標記有死亡區(qū)的壞死因子受體1相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | PHLP: 抑制基因PHLPP抗體 0.2ml |
Anti-CDK2/FITC 熒光素標記周期素依賴性激酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | RKO-E6(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞) 5×106cells/瓶×2 |
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。