詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腓腸肌采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腓腸肌經(jīng)α-Sarcometric actin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔腓腸肌原代細(xì)胞 | 組織來源 | 骨骼肌 |
英文名稱 | Rabbit Gastrocnemius Muscle Cells | 貨號(hào) | YS-01X8338 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
兔腓腸肌細(xì)胞分離自小腿肌肉組織;腓腸肌位于小腿后面的皮下,是一個(gè)淺表的肌肉,當(dāng)人體站立時(shí),可以在小腿后面看到隆起肌肉的輪廓就是腓腸肌。腓腸肌為小腿后側(cè)群淺組肌肉,有內(nèi)、外二頭,內(nèi)側(cè)頭起自股骨內(nèi)側(cè)髁上的三角形隆起,外側(cè)頭起自股骨外側(cè)髁的近側(cè)端,在二頭的深面各有一滑膜囊。腓腸肌的二肌腹增大,在腘窩下角彼此鄰近,所成夾角多為25°-30°,此肌下行與比目魚肌移行為跟腱,止于跟骨結(jié)節(jié)。腓腸肌的動(dòng)脈發(fā)自腘動(dòng)脈、靜脈與動(dòng)脈伴行,注入腘靜脈或小隱靜脈。腓腸肌的全部來自脛。包括內(nèi)、外側(cè)肌。腓腸肌在行走及站立時(shí)能提足跟向上,直立時(shí),腓腸肌和比目魚肌都參加強(qiáng)固膝關(guān)節(jié),并調(diào)節(jié)小腿和足的位置。脛前皮膚缺損或深部竇道及瘢痕,可以切取腓腸肌內(nèi)側(cè)頭及其皮面皮膚所形成的肌皮瓣向前旋轉(zhuǎn)。腓腸肌還可影響足的縱弓,該肌癱瘓或時(shí),足縱弓將加深。該肌由脛支配,股骨髁上骨折時(shí),因腓腸肌收縮遠(yuǎn)側(cè)端常自后移位。腓腸肌是脛骨和腓骨后面的一塊肌肉。腓腸肌細(xì)胞屬于骨骼肌細(xì)胞的一種,骨骼肌又稱橫紋肌,肌肉中的一種,約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長(zhǎng)柱形的多核細(xì)胞,肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌,橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌,其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官,有豐富的血管、淋巴分布,在軀體支配下收縮或舒張,進(jìn)行隨意運(yùn)動(dòng)。肌肉可根據(jù)共形狀、大小、位置、起止點(diǎn)、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨狀肌等。骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀,不分支,有明顯橫紋,核很多,且都位于細(xì)胞膜下方。肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長(zhǎng)軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維。每一肌原纖維都有相間排列的明帶(Ⅰ帶)及暗帶(A帶)。明帶染色較淺,而暗帶染色較深。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線。H線的中部有一M線。明帶中間,有一條較暗的線稱為Z線。兩個(gè)Z線之間的區(qū)段,叫做一個(gè)肌節(jié)。骨骼肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細(xì)胞貼壁伸展,細(xì)胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細(xì)胞匯合,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng),高低起伏;細(xì)胞密度低時(shí),常交織成網(wǎng)狀;密度高時(shí),則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。
培養(yǎng)信息:
包被條件:PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基:含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔腓腸肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品:
UM-UC-3, 人膀胱移行細(xì)胞癌 小鼠成纖維細(xì)胞,3T3/e細(xì)胞 J774A1(單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞) | DSIP(Human delta sleep-inducing peptide) ELISA Kit 人促睡眠肽 96T |
RanBP3: RAN結(jié)合蛋白3抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh PTPN7/HePTP 非受體型蛋白酪0酸酶7抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-HER2 receptor/FITC 熒光素標(biāo)記抗HER2受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | CCDC8: 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BPIL1 殺菌通透性增加蛋白樣1抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-SDF-1/CXCL12 /FITC 熒光素標(biāo)記基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子4抗體 Anti-FGF3/HSTF1/HBGF-4 0.1ml | alpha 1 Fetoprotein: 甲胎蛋白抗體 0.1ml |
小鼠前胃癌細(xì)胞;MFC | 人腦動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
COS-6細(xì)胞,非洲綠猴腎細(xì)胞 A375(人類惡性黑色素瘤) 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-P1 | EFNA5 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)(Fc 標(biāo)簽) |
DU 145, 人前列腺癌細(xì)胞 | 人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞;NCI-H157 |
CM-M009小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | CL-0114Hs 578T(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞 人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞,hFOB 1.19細(xì)胞 PIEC(豬髖動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞) | 兔腓腸肌原代細(xì)胞CCDC8: 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體 0.2ml |
非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO | A-673細(xì)胞,橫紋肌瘤細(xì)胞 Hela細(xì)胞耐藥亞株,Hela/DDP細(xì)胞 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T3-L1 |
HUtMEC-c 人子宮微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUtMEC) 500,000cells 臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14) 5×106cells/瓶×2 |
人上皮細(xì)胞;Ca Ski | IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GRM1 促代謝型谷受體1抗體 規(guī)格 0.1ml | 人絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞HCMSC |
FGF17: 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子17抗體 0.1ml | Anti-Lysozyme 抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml |
ASMA(Mouse Anti-Smooth Muscle Antibody) ELISA Kit 小鼠抗平滑肌抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T | 小鼠前胃癌細(xì)胞;MFC |
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。