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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔腸微血管內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔腸微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔腸微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 腸 |
英文名稱 | Rabbit Intestinal Microvascular Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X8332 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
兔腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自腸道組織；腸道指的是從胃幽門至門的消化管。腸是消化管中長的一段，也是功能重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進(jìn)行的，大腸主要濃縮食物殘渣，形成糞便，再通過直腸經(jīng)門排出體外。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實它的功能還遠(yuǎn)不止此——它還是機(jī)體內(nèi)大的微生態(tài)系統(tǒng)。微血管是極細(xì)微的血管，管徑平均為6-9μm，連于動、靜脈之間，互相連接成網(wǎng)狀。微血管壁薄，管徑較小，血流很慢，通透性大。其功能是利于血液與組織之間進(jìn)行物質(zhì)交換。其管壁主要由一層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成，在內(nèi)皮外面有一薄層結(jié)締組織。另外還常可見到一種扁而有突起的細(xì)胞貼在微血管的管壁外面，稱為周細(xì)胞。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞;BV2 | Nm23： 轉(zhuǎn)移抑制基因抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh MC3 Receptor 黑素皮質(zhì)素受體3抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-TSHR/FITC 熒光素標(biāo)記促甲狀腺素受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Fut4/CD15/SSEA-1(Stage-specific embryonic surface antigen 1) 階段特異性胚胎表面抗原-1抗原 0.5mg | Anti-Orexin receptor 1/2 食欲素受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-GAPDH /FITC 熒光素標(biāo)記3-0酸甘油醛脫氫酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh Slc22a5 溶質(zhì)載體家族蛋白22成員5抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-phospho-FAK(pSer732)/FITC 熒光素標(biāo)記抗0酸化粘著斑激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-phospho-ATF2(Thr69/71) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、猴0酸化活化復(fù)制因子2(phospho ATF 2)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
CX3CL1 Others Canine 狗 Fractalkine / CX3CL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | VWC2 Others Human 人 VWC2 / Brorin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人間充質(zhì)干細(xì)胞-脂肪 | AKT1 Others Human 人 AKT1 / PKB / PKBα 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
IL10RB Others Human 人 IL10Rb 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | SPG21 Others Mouse 小鼠 SPG21 / ACP33 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
EPOR Others Mouse 小鼠 EPOR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | DDC Others Human 人 DOPA Decarboxylase / DDC 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
KM小鼠子瘤株;U27 | 兔腸微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞Anti-Orexin receptor 1/2 食欲素受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
ACVR1B Others Rat 大鼠 ACVR1B / ALK-4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | rRTEC, 大鼠腎小管上皮細(xì)胞 |
臍靜脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | GFRA2 Others Human 人 GFRA2 / GFRα2 / GDNFRB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
A673細(xì)胞，橫紋肌瘤細(xì)胞 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H838細(xì)胞 CL-0460U14-GFP(小鼠子細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | GPRIN3： G蛋白調(diào)節(jié)誘導(dǎo)突增生蛋白3抗體 0.1ml |
Human plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1 ELISA Kit 人纖溶酶原激活物抑制因子1Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | EPOR & CD131 Others Human 人 EPOR & CD131 Homodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
外周髓0脂P0蛋白/P0蛋白抗體 Anti-Myelin P0 protein 0.2ml | HEV-IgM(Human Hepatitis D virus IgM) ELISA Kit 人戊型肝炎病毒IgM 96T |
AMN1： 細(xì)胞核重定位及紡錘體檢查點(diǎn)蛋白AMN1抗體 0.2ml | CX3CL1 Others Canine 狗 Fractalkine / CX3CL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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