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詳細(xì)介紹
兔背根神經(jīng)元原代細(xì)胞
兔背根元細(xì)胞分離自脊椎背根節(jié)；感覺母細(xì)胞發(fā)出軸突，呈束狀，左右對稱地從管的背部進(jìn)入，此時的脊節(jié)即改稱為背根節(jié)。系統(tǒng)基本的結(jié)構(gòu)和功能單位是元，即細(xì)胞，其大小和外觀在中樞系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體，內(nèi)含絲、微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示，在光鏡下是灰藍(lán)色斑塊狀，稱為尼氏小體。樹突和軸突是元的突起，能在元之間傳遞電沖動，突起的大小和形態(tài)各不相同，很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別。脊髓背根節(jié)是周圍的主要傳入元，是感覺信號傳導(dǎo)的中繼站。背根元細(xì)胞的獲取較為困難，需要在盡可能短的時間內(nèi)通過解剖顯微鏡獲得一定量的背根節(jié)組織。組織體外培養(yǎng)方法是當(dāng)代科學(xué)一項(xiàng)很有價(jià)值的研究手段，背根節(jié)富含周圍系統(tǒng)感覺元，已廣泛用于軸突的導(dǎo)向及再生、中樞及周圍系統(tǒng)的髓鞘形成、營養(yǎng)因子作用及受體分布、細(xì)胞衰老機(jī)制、基因治療、組織工程等科學(xué)的研究。
英文名稱 | Rabbit Dorsal Root Neuron Cells | 組織來源 | 脊髓 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8317 |
細(xì)胞形態(tài) | 元細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔背根神經(jīng)元細(xì)胞
組織來源：脊髓
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件：PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基：含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：元細(xì)胞樣
傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群
消化液：0.125%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔背根元細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔背根元采用膠原酶-酶聯(lián)合消化法、元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的兔背根元經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
小鼠雪旺細(xì)胞MSC | Anti-Tubb3 微管蛋白β3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
CYP21B(Human Cytochrome P450c21/21-hydroxylase) ELISA Kit 人細(xì)胞色素P450c21B/21-羥化酶 96T | Anti-MMP-13 /FITC 熒光素標(biāo)記基質(zhì)金屬蛋白酶13抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Thymulin 抗體 規(guī)格 0.2ml | Flt-3L(Human FMS-like tyrosine kinase 3 ligand) ELISA Kit 人FMS樣酪激酶3配體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
HEBP1： 血紅素結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Cathepsin H/CTSH 組織蛋白酶H抗體 規(guī)格 0.1ml |
Factor XI heavy chain： 11重鏈抗體 0.1ml | ER ELISA Kit 大鼠雌二醇受體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
IL1R1 Others Rat 大鼠 IL1R1 / CD121a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | Gibco 10902088 Sf-900 II SFM 1000ml |
人角膜細(xì)胞總RNAHK NA | 小鼠顆粒元(MGC)(1×106) |
HA Others H16N3 甲型流感 H16N3 (A/black-headed gull/Sweden/5/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CD40LG Others Mouse 小鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
TNFRSF8 Others Human 人 TNFRSF8 / CD30 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | HPrSMC Pellet 人類前列腺平滑肌細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人星形膠質(zhì)細(xì)胞cDNAHA cDNA |
MiaPaCa-2, 人胰腺癌細(xì)胞 | 兔背根神經(jīng)元原代細(xì)胞Flt-3L(Human FMS-like tyrosine kinase 3 ligand) ELISA Kit 人FMS樣酪激酶3配體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
大鼠小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞(RAc)(5×105) Ishikawa, 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系 Human | 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T3-Swiss albino |
二氫還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細(xì)胞;CHO/dhFr- | HFF細(xì)胞，小兒細(xì)胞 小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞,SH2細(xì)胞 星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基AM |
TF Others Sus scrofa (Pig) 野豬 ansferrin / TF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | sIgA/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人分泌型IgA抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Osteocalcin： 骨鈣蛋白/骨鈣素抗體 0.1ml | DKK1 Others Rhesus 恒河猴 DKK-1 / Dkk1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
Sox3： 轉(zhuǎn)錄因子Sox3抗體 0.2ml | phospho-CARM1(Ser228)： 0酸化蛋白精酸N甲基4抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh IgG/FITC FITC標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.3ml | IL1R1 Others Rat 大鼠 IL1R1 / CD121a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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