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人椎間盤纖維環(huán)原代細(xì)胞
人椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞分離自椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，由軟骨板、纖維環(huán)、髓核組成的一個(gè)密封體。上下有軟骨板，是透明軟骨復(fù)蓋于椎體上，下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成，位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環(huán)成為堅(jiān)實(shí)的組織，能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負(fù)荷。纖維環(huán)的前側(cè)及兩側(cè)較厚，而后側(cè)較薄。纖維環(huán)的前部有強(qiáng)大的前縱韌帶，后側(cè)的后縱韌帶較窄、較薄。纖維環(huán)細(xì)胞密度為9000個(gè)細(xì)胞/mm3，其外層的細(xì)胞呈梭型，主要屬于纖維細(xì)胞，內(nèi)層細(xì)胞呈圓形，主要屬于軟骨細(xì)胞。在培養(yǎng)的情況下，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)，它們的核較圓，核仁較明顯。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)線粒體多，為橢圓形，有的可看到雙層單位膜，由單位膜包繞初級(jí)深酶體和次級(jí)深酶體。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復(fù)合體和分泌顆粒，纖維環(huán)細(xì)胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛，保證纖維環(huán)生理代謝活動(dòng)所需的構(gòu)造物質(zhì)的供給。一但這種供給減少，纖維環(huán)的生物性能就會(huì)減弱，椎間盤開始退變。
英文名稱 | Human Intervertebral Disc Fibroblast Cells | 組織來源 | 椎間盤組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7530 |
細(xì)胞形態(tài) | 梭形、多角形 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞
組織來源：椎間盤組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人椎間盤纖維環(huán)采用膠原酶-蛋白酶聯(lián)合消化法并結(jié)合軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人椎間盤纖維環(huán)經(jīng)Ⅰ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A5 | Anti-gamma tubulin 微管蛋白-gamma抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
IDO(Human indoleamine 2,3-dioxygenase) ELISA Kit 人吲哚胺2,3-雙加氧酶 96T | Anti-MMP-11/FITC 熒光素標(biāo)記基質(zhì)金屬蛋白酶-11抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Thyroxine Binding Globulin/TBG/Serpin A7 甲狀腺素結(jié)合球蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml | MMP-1(Human Matrix metalloproteinase 1) ELISA kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶1Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
Haptoglobulin beta： 結(jié)合球蛋白β抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Cathepsin L/CTSL 組織蛋白酶L抗體 規(guī)格 0.1ml |
FLAG Tag (CT)： FLAG Tag標(biāo)簽抗體(C端) 0.1ml | ACTH ELISA Kit 大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
CRIP2 Others Human 人 CRIP2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CD86 Others Mouse 小鼠 CD86 / B7-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
人結(jié)膜成纖維細(xì)胞cDNAHConF cDNA | IL6ST Others Rat 大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
CSH1 Others Human 人 CSH1 / Lactogen 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | ABHD4 Others Human 人 ABHD4 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
Eca-109(人食管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0246YAC-1(小鼠淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 中國倉鼠肺細(xì)胞;V79 | SOST Others Human 人 SOST / Sclerostin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
MSC, 小鼠雪旺細(xì)胞 | 人椎間盤纖維環(huán)原代細(xì)胞MMP-1(Human Matrix metalloproteinase 1) ELISA kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶1Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(RA)(5×105) Caki-1, 人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞 Human | 小型豬腎細(xì)胞;MPK |
GBC-SD, 人膽囊癌細(xì)胞 | NCL-H548細(xì)胞，人胰腺癌細(xì)胞 人癌細(xì)胞,MDA-MB-231細(xì)胞 巨噬細(xì)胞培養(yǎng)基MaM |
KLRK1 Others Human 人 NKG2D / CD314 / KLRK1 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | Anti-PTPRJ/CD148/DEP1/FITC 熒光素標(biāo)記CD148抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
2-Oct： 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白2抗體 0.1ml | RBL-2H3(大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 EphA3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
SOX6： 核轉(zhuǎn)錄因子SOX6抗體 0.2ml | phospho-CBL2 (Tyr700)： 0酸化原癌基因CBL2抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml | CRIP2 Others Human 人 CRIP2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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