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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的人主動脈外膜成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的人主動脈外膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人主動脈外膜成纖維原代細(xì)胞 | 組織來源 | 主動脈 |
英文名稱 | Human Aortic Adventitial Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X8314 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
人主動脈外膜成纖維細(xì)胞分離自主動脈血管外膜組織；血管外膜是由疏松結(jié)締組織組成，其中含螺旋狀或縱向分布的彈性纖維和膠原纖維。血管壁的結(jié)締組織細(xì)胞以成纖維細(xì)胞為主，當(dāng)血管受損傷時(shí)，成纖維細(xì)胞具有修復(fù)外膜的能力。有的動脈中膜和外膜的交界處，有密集的彈性纖維組成的外彈性膜。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的血管外膜成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。血管外膜成纖維細(xì)胞是血管外膜的主要組成細(xì)胞之一，其主要生理功能合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人主動脈外膜成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B2 | NAV3： 元引導(dǎo)蛋白3抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh MCKD2/UMOD 尿調(diào)節(jié)蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-TSARG6/FITC 熒光素標(biāo)記生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
STAT1(signal transducers and activators of transcription 1) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗原 0.5mg | Anti-Orexin-A 增食欲素-A/欲激素AMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
Anti-Galanin/FITC 熒光素標(biāo)記節(jié)肽抗體“甘丙肽"IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLC25A20 線粒體二羧酸載體蛋白20抗體 規(guī)格 0.1ml |
Anti-PHB/FITC 熒光素標(biāo)記抑制素/抑制因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-AT1R/FITC 熒光素標(biāo)記血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
HGF Others Mouse 小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | BC-022(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠漿細(xì)胞瘤;MPC-11 |
人結(jié)膜成纖維細(xì)胞總RNAHConF NA | CAT Others Human 人 CAT / Catalase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
IL18BP Others Mouse 小鼠 IL18BP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CD2 Others Canine 狗 CD2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CD180 Others Human 人 CD180 / RP105 / LY64 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | IgG2a Others Mouse 小鼠 IgG2a-Fc 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
MTT細(xì)胞活力和增殖檢測試劑盒MTT | 人主動脈外膜成纖維原代細(xì)胞Anti-Orexin-A 增食欲素-A/欲激素AMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
HMGB1 Others Mouse 小鼠 HMGB1 / HMG1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | RSC96(大鼠雪旺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
破骨細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | LAYN Others Human 人 Layilin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
兔源細(xì)胞 長鼻袋鼠腎細(xì)胞，Pt K1細(xì)胞 RBL-1細(xì)胞，大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞 | GMIP： GEM相互作用蛋白抗體 0.2ml |
Human apoprotein B100,apo-B100 ELISA Kit 人載脂蛋白B100Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | EFNB2 Others Human 人 Ephrin-B2 / EFNB2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
粘蛋白-1/上皮膜抗原抗體 Anti-mucin-1/Muc-1/CD227 antigen 0.1ml | FT4 ELISA Kit 大鼠游離甲狀腺素 96T |
ARSF： 芳香基酯酶F抗體 0.2ml | HGF Others Mouse 小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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