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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
普諾賽實(shí)驗(yàn)室分離的人支氣管上皮采用蛋白酶-蛋白酶混合消化法結(jié)合機(jī)械刮刷并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
普諾賽實(shí)驗(yàn)室分離的人支氣管上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人支氣管上皮原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 支氣管組織 |
英文名稱 | Human Bronchial Epithelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X7040 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人支氣管上皮細(xì)胞分離自支氣管組織；支氣管(Bronchi)，是指由氣管分出的各級(jí)分枝，由氣管分出的一級(jí)支氣管，即左、右主支氣管。左主支氣管與右主支氣管相比較，前者較細(xì)長(zhǎng)，走向傾斜；后者較粗短，走向較前者略直，所以經(jīng)氣管墮入的異物多進(jìn)入右主支氣管。支氣管和氣管還有以區(qū)別就是，氣管是以“C"型的氣管軟骨為支架，而支氣管不是。支氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線，不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞，還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子，從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)。支氣管上皮細(xì)胞在哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發(fā)病機(jī)制中均起著重要的作用。體外培養(yǎng)的原代支氣管上皮細(xì)胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上存在很大的相似性，因此，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
THLE-3人肝永生化細(xì)胞 THLE-3 human liver immortalized cell MD 21793的BEGM培養(yǎng)基(目錄號(hào)CC3170) | ANKRD54： 錨蛋白重復(fù)域54抗體 0.2ml |
Anti-HPL/PL 人胎盤(pán)泌乳素抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh AAT1/C3orf15 3號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框15抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-CBL2 /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠原癌蛋白CBL2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ICAM5/Telencephalin 細(xì)胞間粘附分子5抗體 規(guī)格 0.1ml |
Apo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J) 凝聚素α/β抗原 0.5mg | HIF-1 Alpha： 缺氧誘導(dǎo)因子1α 抗體HIF-1α 0.1ml |
IgG/FITC FITC標(biāo)記的驢抗羊IgG 0.3ml | Rhesus antibody Rh FAK2/PYK2 富含的酪激酶2抗體 規(guī)格 0.1ml |
INHBB Protein Human 重組人 Inhibin beta B / INHBB / Activin B 蛋白 (His 標(biāo)簽) | 人肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
P815細(xì)胞，小鼠肥大細(xì)胞癌細(xì)胞 V79-4(中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞) 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-C;Vero-HCV-C | CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 46-113, His 標(biāo)簽) |
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC-C | 人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5 |
C26瘤 結(jié)腸癌 | CEM/C1(人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
犬源細(xì)胞 成纖維細(xì)胞，L929細(xì)胞 RCBBF細(xì)胞，兔角膜后基質(zhì)層成纖維細(xì)胞 | 人支氣管上皮原代細(xì)胞Rhesus antibody Rh ICAM5/Telencephalin 細(xì)胞間粘附分子5抗體 規(guī)格 0.1ml |
NCI-H295R(人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | CD86 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD86 / B7-2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
3T3 swiss細(xì)胞，swiss鼠胚胎成纖維細(xì)胞 人癌細(xì)胞,MB-271細(xì)胞 LDH細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒LDH | 人真皮成纖維母細(xì)胞-新生HDF-n |
MGC80-3(MGC-803)人胃癌細(xì)胞 | Rhesus antibody Rh sIgA/APC APC標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 規(guī)格 0.1ml |
F VIII Ag ELISA Kit 大鼠第八因子相關(guān)抗原 96T | KITLG Protein Human 重組人 SCF / C-kit ligand 蛋白 (aa 1-189, His 標(biāo)簽) |
AEBP1 (Adipocyte enhance binding protein 1) 脂肪細(xì)胞增強(qiáng)結(jié)合蛋白1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg | E2(Human Estradiol) ELISA Kit 人雌二醇Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
Mitochondrial Pyruvate dehydrogenase kinase 1： 酸脫氫酶激酶1抗體 0.1ml | INHBB Protein Human 重組人 Inhibin beta B / INHBB / Activin B 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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