化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的人真皮毛乳頭采用膠原酶 - 蛋白酶混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的人真皮毛乳頭經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人真皮毛乳頭原代細胞 | 組織來源 | 毛囊 |
英文名稱 | Human Dermal Hair Papilla Cells | 貨號 | YS-01X8312 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人真皮毛乳頭細胞分離自皮膚毛囊組織；毛囊是表皮細胞連續(xù)形成的袋樣上皮。其基底是真皮凹進的真皮毛乳頭，中心是一根毛發(fā)，立毛肌的一側(cè)斜附在毛囊壁上，附著點的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸，毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下組織中，毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度，它是由包繞毛發(fā)與表皮相連的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個結(jié)構比較復雜的器官附件組織。毛囊實際上是由結(jié)締組織和上皮兩部分所組成，除了具有結(jié)締組織和血管的真皮乳頭（毛乳頭）外，毛囊其余部分都是由表皮細胞分化而來。真皮毛乳頭細胞位于毛囊基底部，是一類成纖維細胞。在毛囊發(fā)育早期，真皮細胞向單層上皮細胞發(fā)出第一真皮信號，刺激上皮局部形成毛基板。隨后毛基板細胞向下方的真皮發(fā)出第一表皮信號，誘導其形成有成纖維細胞組成的凝集細胞團。在此過程中，毛母質(zhì)細胞逐漸包裹凝集細胞團，形成成熟的真皮毛乳頭細胞。作為毛囊中的重要細胞群，真皮毛乳頭細胞的分子機制和臨床應用正在被逐漸認識和解析。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基：含FBS、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：梭形、多角形
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人真皮毛乳頭細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
SP2/0, 小鼠骨髓瘤細胞 小細胞肺癌細胞,NEI-H209細胞 ECV304(人臍靜脈內(nèi)皮細胞株) | Rhesus antibody Rh Gephyrin 橋尾蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml |
TIMP-4(Human tissue inhibitors of metalloproteinase 4) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/Gold 膠體金標記的小鼠抗IgG 0.5ml |
IRS-3： 胰島素受體底物-3抗體 0.2ml | PAI ELISA Kit 大鼠纖溶酶原激活物抑制因子 96T |
Rhesus antibody Rh RFPL4B/RNF211 環(huán)指蛋白211抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Phospho-Lck (Tyr505) /FITC 熒光素標記0酸化淋巴細胞特異性蛋白酪激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh phospho-SYT1(Thr202) 0酸化突觸結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml | RBP ELISA Kit 大鼠結(jié)合蛋白 96T |
小鼠成肌細胞;C2C12 | 人小腸粘膜上皮細胞培養(yǎng)基 100mL |
P388細胞，小鼠白血病細胞 空腸彎曲桿菌 大額牛皮膚成纖維樣細胞;BOS-1 | CCL20 Protein Mouse 重組小鼠 CCL20 / MIP-3 alpha 蛋白 (His 標簽) |
人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞;HK-2 | 敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21 |
CM-M065小鼠腎上皮細胞培養(yǎng)基100mL | 人小腦星形膠質(zhì)細胞裂解物HA-c L |
J774A1細胞，單核細胞巨噬細胞 人非小細胞肺腺癌細胞,NCI-H157細胞 CL-0444SNU-5(人胃癌細胞)5×106cells/瓶×2 | 人真皮毛乳頭原代細胞PAI ELISA Kit 大鼠纖溶酶原激活物抑制因子 96T |
人肺泡上皮細胞培養(yǎng)基 100mL | Promocell C-20011 Keratinocyte GrowthMedium 2, 角質(zhì)細胞生長培養(yǎng)基2型(即用型) 500ml |
MAG Others Human 人 MAG / GMA / Siglec-4 人細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H071人腎動脈平滑肌細胞培養(yǎng)基100mL |
IFNG Protein Mouse 重組小鼠 IFNG / Ierferon Gamma 蛋白 (His 標簽) | Rhesus antibody Rh API2 凋亡抑制因子2抗體 規(guī)格 0.2ml |
phospho-B Raf (Thr598)： 0酸化B-Raf抗體 0.1ml | 胎兒骨髓間質(zhì)干細胞 Fetal bone marrow mesenchymal stem cells |
Anti-P/FITC 熒光素標記Raf激酶抑制蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | phospho-PLB(Ser16+Thr17)： 0酸化心臟0蛋白抗體 0.1ml |
Anti-Cdc6/FITC 熒光素標記細胞分裂周期蛋白6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 小鼠成肌細胞;C2C12 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
化工儀器網(wǎng)