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詳細介紹
人陰道平滑肌原代細胞
人陰道平滑肌細胞分離自陰道組織；陰道位于膀胱、尿道和直腸之間，是一個富有彈性的管狀器官。它在人類生殖過程中具有多種生理功能，是連接子宮與外陰的通道，是排出月經(jīng)血、娩出嬰兒的必經(jīng)之路，也是一個重要的性交器官。陰道壁按組織學(xué)由外到內(nèi)分三層，即黏膜層、肌層和外膜。平滑肌，是非橫紋肌的肌肉組織。分布在人體動脈和靜脈血管壁、膀胱、子宮、男性和女性生殖道、消化道、呼吸道、眼睛的睫狀肌和虹膜。陰道平滑肌分離自陰道壁肌層組織，平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。
英文名稱 | Human Vaginal Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 陰道 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8164 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人陰道平滑肌細胞
組織來源：陰道
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳3-5代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人陰道平滑肌細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的人陰道平滑肌采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的人陰道平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
WISH細胞，人羊膜細胞 普通變形桿菌 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO DUX B11 Carrying pBSCRLc/pTCSgpt clone 35.6 | p2(Human myelin protein 2) ELISA Kit 人髓鞘蛋白 96T |
RASSF6： RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh PYGL 肝糖原0酸化酶抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-HDAC8 /FITC 熒光素標記組蛋白去乙?；?span>8抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | C17orf74： 17號染色體開放閱讀框74抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BRCC3/BRCC36 癌易感基因復(fù)合物亞基蛋白3抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Phospho-Connexin 43 (Ser368) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠等0酸化Connexin 43蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
第八因子相關(guān)抗原抗體 Anti-factor VIII 0.1ml | AIPL1： 遺傳性失明相關(guān)蛋白AIPL1抗體 0.1ml |
CXCL9 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白 | CM-R014大鼠氣管和支氣管上皮細胞培養(yǎng)基100mL |
GBC-SD, 人膽囊癌細胞 猴腎細胞,HepII細胞 TE 354.T(人皮膚基底細胞癌) | 綠色熒光蛋白標記小鼠前胃癌細胞;MFC-GFP |
人皮膚成纖維細胞;CCC-HSF-1 | 體細胞;HEL |
人胰腺星狀細胞培養(yǎng)基 100mL | CL-0096HCT 116(人結(jié)腸癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
狗肺成纖維樣細胞;DogL1 非洲綠猴腎細胞，VERO C1008細胞 N/N1003A(RLE)細胞，兔晶體上皮細胞永生系 | 人陰道平滑肌原代細胞C17orf74： 17號染色體開放閱讀框74抗體 0.2ml |
非洲綠猴腎細胞;BS-C-1 | NCI-H838細胞，人非小細胞肺癌細胞 大鼠正常肝細胞,BRL-3A細胞 CM-R055大鼠卵巢成纖維細胞培養(yǎng)基100mL |
人齒根膜韌帶成纖維細胞(HPDLF)( 5×105 ) rEPC，大鼠內(nèi)皮祖細胞-骨髓 Rattus | 人卵巢畸胎瘤細胞;PA-1 |
人結(jié)直腸腺癌細胞;SW480 [SW 480;SW-480] | IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗大鼠IgM 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GRP 促胃泌素釋放肽抗體 規(guī)格 0.2ml | 人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞;M619 |
ESAM： 內(nèi)皮細胞粘附分子抗體 0.1ml | Anti-LRRK2 富亮重復(fù)激酶2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Fbg(Mouse Fibrinogen) ELISA Kit 小鼠血纖蛋白原Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | CXCL9 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白 |
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