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詳細(xì)介紹
人胰腺癌組織源星狀原代細(xì)胞
人胰腺癌組織源星狀細(xì)胞分離自患有胰腺癌病人的胰腺癌組織；胰腺癌是一種惡性程 度很高，診斷和治療都很困難的消化道惡性腫瘤，約90%為起源于腺管上皮的導(dǎo)管腺癌。其發(fā)病率和死亡率近年來明顯上升。5年生存率<1%，是預(yù)后差的惡性腫瘤之一。胰腺癌早期的確診率不高，手術(shù)死亡率較高，而很低。胰腺癌 的病因尚不十分清楚。其發(fā)生與吸煙、飲酒、高脂肪和高蛋白飲食、過量飲用咖啡、環(huán)境污染及遺傳因素有關(guān)；近年來的調(diào)查報告發(fā)現(xiàn)糖尿病人群中胰腺癌的發(fā) 病率明顯高于普通人群；也有人注意到慢性胰腺炎病人與胰腺癌的發(fā)病存在一定關(guān)系，發(fā)現(xiàn)慢性胰腺炎病人發(fā)生胰腺癌的比例明顯增高；另外還有許多因素與此 病的發(fā)生有一定關(guān)系，如職業(yè)、環(huán)境、地理等。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的進步，大部分癌癥的生存率都在提高，例如乳腺癌，結(jié)直腸癌等腫瘤，近幾十年來，生存率得到 了大幅度的提升。但胰腺癌的生存率一直停滯不前，缺乏有效的治療方法，高的死亡率使其成為“癌中之"，近年來胰腺癌微環(huán)境的研究引起了諸多學(xué)者的重視。胰腺癌微環(huán)境構(gòu)成復(fù)雜，其中，胰腺星狀細(xì)胞是胰腺癌微環(huán)境中重要的間質(zhì)細(xì)胞之一，在胰腺癌細(xì)胞生長、遷移、侵襲、血管生成、免疫逃逸、轉(zhuǎn)移及耐藥中發(fā)揮重要的作用。因此針對胰腺星狀細(xì)胞和胰腺癌細(xì)胞相互作用的研究有望提高胰腺癌患者的預(yù)后。胰腺星狀細(xì)胞(pancreaticstellate cells , PSC)是一種胰腺特異性間質(zhì)細(xì)胞，多在胰腺組織內(nèi)血管和導(dǎo)管周圍聚集，環(huán)繞在腺泡的基底部位，正常靜比狀態(tài)下只占胰腺細(xì)胞的4%左右，細(xì)胞質(zhì)中含有豐富的A脂滴，以表達膠質(zhì)纖絲酸性蛋白質(zhì)(glial filament acidic protein , GFAP )、結(jié)合蛋白(Desmin)為特征。在胰腺組織損傷、應(yīng)激等條件下PSC被激活，成為一種肌成纖維細(xì)胞，胞質(zhì)中富含A的脂滴消失，以表達α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin , α-SMA)為標(biāo)志，能大量合成細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix , ECM)和分泌多種細(xì)胞因子。胰腺癌微環(huán)境中存在大量激活的PSC，在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。PSC通過誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞(pancreatic cancercells , PCC)上皮一間質(zhì)轉(zhuǎn)變(epithelial-mesenchymaltransition , EMT)促進胰腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)腫瘤灶到達靶器官的一個多步驟過程，眾多研究表明EMT與胰腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。EMT主要的特征是上皮細(xì)胞特征丟失同時伴間質(zhì)細(xì)胞特征獲得，如E一鈣茹蛋白(E-cadherin)表達下降，波形蛋白(Vimentin)表達上調(diào)。karnevi等研究發(fā)現(xiàn)，PSC與PCC共培養(yǎng)后能夠誘導(dǎo)PCC上皮性細(xì)胞標(biāo)志(E-cadherin , β-catenin)丟失，促進間質(zhì)性細(xì)胞標(biāo)志(Vimentin,Snai-1）獲得，表明PSC在PCC的EMT形成過程中發(fā)揮了重要的作用。PSC參與胰腺癌進展的各個環(huán)節(jié)，而PSC活化是PSC發(fā)揮功能的重要部分。
英文名稱 | Human Pancreatic Cancer Tissue-Derived Stellate Cells | 組織來源 | 胰腺癌 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8311 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人胰腺癌組織源星狀細(xì)胞
組織來源：胰腺癌
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS、EGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人胰腺癌組織源星狀細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的人胰腺癌組織源星狀采用膠原酶消化法結(jié)合密度梯度離心法制備而來制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的人胰腺癌組織源星狀經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
小鼠原B細(xì)胞株;BaF3 | NF-κB p65 ELISA Kit 大鼠核因子κB亞基p65親和肽Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
C1orf156： 1號染色體開放閱讀框156抗體 0.2ml | Glycine Receptor alpha 3： 甘酸受體α3/GlyR α3抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh CECR1/ADGF 貓眼綜合征染色體候選基因1抗體 規(guī)格 0.2ml | PIWIL4： piwi樣4蛋白抗體 0.1ml |
Anti-NPPC/FITC 熒光素標(biāo)記促尿排泄肽前體C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | FOXF1(Forkhead box protein F1) 叉頭蛋白F1抗原 0.5mg |
IgG/Gold 金標(biāo)記小鼠抗兔IgG (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5ml | MMP13： 基質(zhì)金屬蛋白酶13抗體 0.1ml |
FCER2 Others Human 人 CD23 / FCER2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | SERPINA3C Others Mouse 小鼠 SERPINA3C / Serpina3c 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HT-29 | PLAU Others Human 人 Urokinase / PLAU (activated by ypsin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
NCI-H2227(人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 FRhK-4(恒河猴胚腎細(xì)胞) | RPS6KA6 Others Human 人 RSK4 / RPS6KA6 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CD8A Others Human 人 CD8A / MAL 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | TT細(xì)胞，人骨髓樣甲狀腺癌細(xì)胞 人腎小球系膜細(xì)胞,HMC細(xì)胞 小膠質(zhì)細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
RN-h, 大鼠海馬趾元 | 人胰腺癌組織源星狀原代細(xì)胞PIWIL4： piwi樣4蛋白抗體 0.1ml |
人腎透明細(xì)胞癌;Caki-1 大鼠海馬元細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 人角膜上皮細(xì)胞裂解物HCEpiCL |
CL-0189Raji(人Butt's淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | CPLX3 Others Human 人 CPLX3 / Complexin 3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CD99 Others Mouse 小鼠 CD99 / PILR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | Anti-IL-13Ra1/FITC 熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-13受體a1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-RSK3/Ribosomal S6 kinase 3 核糖體蛋白S6激酶家族RSK3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | BT474細(xì)胞，導(dǎo)管瘤細(xì)胞 人絨毛膜癌,JEG細(xì)胞 人牙周膜成纖維細(xì)胞RNAHPLR miRNA5 μg |
Rhesus antibody Rh Phospho-p40phox (Thr154) 0酸化嗜粒細(xì)胞胞漿因子4抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KIZUNA/C20orf19 20號染色體開放閱讀框19抗體 規(guī)格 0.2ml |
LH ELISA Kit 魚促黃體激素 96T | FCER2 Others Human 人 CD23 / FCER2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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