化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
人羊膜間充質(zhì)干原代細(xì)胞
人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞分離自胎盤羊膜組織；胎盤(placenta)是哺乳動(dòng)物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤從母體取得營養(yǎng)，而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。羊膜是胎盤的內(nèi)層，與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似，含有眼表上皮細(xì)胞，包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長所需要的物質(zhì)，其光滑，無血管、及淋巴，具有一定的彈性；在電鏡下，其分為五層：上皮層、基底膜、致密層、纖維母細(xì)胞層和海綿層，羊膜基底膜和羊膜羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元，主要為Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份。羊膜細(xì)胞主要由羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞組成，均具有多分化潛能，可轉(zhuǎn)化為元，且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和營養(yǎng)因子的功能。
英文名稱 | Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells | 組織來源 | 羊膜 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8051 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞
組織來源：羊膜
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3-5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的人羊膜間充質(zhì)干采用 - 膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的人羊膜間充質(zhì)干經(jīng)CD44免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
小鼠周成纖維細(xì)胞MPNF | NHLRC1： 肌痙攣性癲癇病相關(guān)EPM2蛋白抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh MCM3 染色體維持缺陷蛋白3抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-TRP2/FITC 熒光素標(biāo)記酪酶相關(guān)蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
STAT6(signal transducers and activators of transduction 6) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗原 0.5mg | Anti-RANK 核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-GAD-67 /FITC 熒光素標(biāo)記谷脫羧酶-67抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLC27A1 長鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-PGC-1 Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-ASPP1/FITC 熒光素標(biāo)記p53凋亡刺激蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
ACVRL1 Others Canine 狗 ALK1 / ACVRL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | FZD10 Others Mouse 小鼠 FZD10 / Frizzled-10 / CD350 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LS 174T [LS174T] | TLR2 Others Rat 大鼠 TLR2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
hMNC-CB-c pooledula-pure 臍帶血來源的人類單核細(xì)胞 人前列腺微血管內(nèi)皮細(xì)胞HPrMEC | CSF1 Others Mouse 小鼠 M-CSF / CSF-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
AHSG Others Human 人 Fetuin-A / AHSG / FETUA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | IgG4 Others Human 人 IgG4-Fc (108 Ser/Pro) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
RSC, 大鼠雪旺細(xì)胞 | 人羊膜間充質(zhì)干原代細(xì)胞Anti-RANK 核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
人骨骼肌成肌細(xì)胞(HSkMM)(5×105) | MM, 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞 |
平滑肌細(xì)胞生長添加物SMCGS | LXN Others Human 人 Latexin / LXN / TCI 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
ACHN細(xì)胞，人腎癌細(xì)胞系 小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞,W6/32細(xì)胞 CL-0438SF767(人腦瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | GDPD3： 甘油0酸二酯酶0酸結(jié)構(gòu)域3抗體 0.2ml |
Human lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISA Kit 人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | NRP2 Others Human 人 Neuropilin 2 / NRP2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-2抗體 Anti-TTF-2 0.1ml | HCV-IgG(Human Hepatitis C virus IgG) ELISA Kit 人丙型肝炎IgG 96T |
phospho-APG4B(Ser309)： 0酸化自噬相關(guān)蛋白4B抗體 0.1ml | ACVRL1 Others Canine 狗 ALK1 / ACVRL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
化工儀器網(wǎng)