化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人小梁網(wǎng)采用組織貼塊法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的人小梁網(wǎng)經(jīng)NSE（元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人小梁網(wǎng)原代細胞 | 組織來源 | 眼球 |
英文名稱 | Human Trabecular Meshwork Cells | 貨號 | YS-01X7418 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人小梁網(wǎng)細胞分離自眼球組織；小梁網(wǎng)由角膜基質纖維、后界膜和角膜內皮向后擴展而成，覆蓋在鞏膜靜脈竇的內側。小梁網(wǎng)細胞在眼內壓調節(jié)中起著關鍵作用；小梁網(wǎng)細胞內有特定的遞質和肽受體，其中包括腎上腺素、乙酰和肽Y。青光眼是由于眼內壓力升高而造成的一種不可逆致盲眼病，小梁網(wǎng)細胞的體外培養(yǎng)是青光眼病因學研究的重要手段之一。在小梁網(wǎng)細胞中，一長串的血管活性多肽和生長因子能夠觸發(fā)細胞內信號傳導機制，小梁網(wǎng)細胞可合成不同類型的細胞外基質蛋白以及金屬蛋白酶。形態(tài)學觀察可見，剛從組織塊長出的原代細胞，形態(tài)各異，多數(shù)呈星狀或不規(guī)則形。細胞有胞突，核橢圓形，胞體肥大，胞漿豐富，且可見吞噬顆粒。隨著細胞的增生及相互融合為單層，細胞的形態(tài)趨于一致。胞漿的色素顆粒及胞突消失，排列緊密呈類似上皮細胞的扁橢圓形或不規(guī)則形。胞體透亮，包膜清晰。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
心肌成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | Anti-CRLF2 胸腺基質淋巴細胞生成素受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Human trypsin ELISA Kit 人酶 96T | Anti-MMP-2/FITC 熒光素標記基質金屬蛋白酶-2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TIEG1/KLF10 TGF-β誘導早期應答基因1抗體 規(guī)格 0.2ml | Tie-2(Human tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2 ELISA Kit 人血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激酶2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
HOXC5： 同源盒蛋白HOXC5抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh CBFA1/RUNX2 核心結合因子α1抗體(成骨特異性轉錄因子)Cbfα1 規(guī)格 0.1ml |
FUT5： FUT5抗體 0.2ml | PGE1 ELISA Kit 大鼠前列腺素E1Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
SERPINA1A Others Mouse 小鼠 Alpha 1 Aiypsin / SerpinA1a 人細胞裂解液 (陽性對照) | PK-15(豬腎細胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV Baculovirus-Insect cells ansfected Lysate (positive corol) (denatured) |
人巨細胞白血病細胞株;Mo7e | TNFRSF1B Others Human 人 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B (aa 1-268, 196 Met/Arg) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人肺間充質干細胞(肺)(HPMSC)(5×105) U251人膠質瘤細胞 Human | HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CDH8 Others Human 人 Cadherin-8 人細胞裂解液 (陽性對照) | THSD1 Others Mouse 小鼠 THSD1 / TMTSP 人細胞裂解液 (陽性對照) |
SV40T轉化的人胚腎細胞(亞系);293T/17 | 人小梁網(wǎng)原代細胞Tie-2(Human tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2 ELISA Kit 人血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激酶2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
L6(大鼠成肌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 AXR2 / CMG2 人細胞裂解液 (陽性對照) | 大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-1 |
大鼠腎小球系膜細胞;HBZY-1 | 非洲綠猴腎細胞系/HCV-p7;Vero-HCV-p7 小鼠黑色素瘤細胞，B16細胞 HGC-27(胃癌細胞(未分化)) |
GAD2 Others Mouse 小鼠 GAD65 / GAD2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | Anti-Phospho-PTEN (Ser380) /FITC 熒光素標記0酸化抑制基因PTEN抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
OVCA2： 卵巢癌相關基因2蛋白抗體 0.2ml | EPHB2 Others Human 人 EphB2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
SPAG8： 相關抗原8抗體 0.2ml | c-Myb： 轉錄激活因子MYB抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG 驢抗人IgG 規(guī)格 1mg | SERPINA1A Others Mouse 小鼠 Alpha 1 Aiypsin / SerpinA1a 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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