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詳細(xì)介紹
人食管平滑肌原代細(xì)胞
人食管平滑肌細(xì)胞分離自食管組織；食管可分為頸段、胸段和腹段，脊椎動(dòng)物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過膈孔與腹腔內(nèi)腹相連，腹段很短與胃相連。哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，肌層上1/3段為骨骼肌，下1/3為平滑肌，中段為骨骼肌和平滑肌混合組成。其中，肌纖維的排列方式分為內(nèi)環(huán)形和外縱形兩層。食管的蠕動(dòng)是由食管平滑肌收縮嚴(yán)格控制，食管還有括約肌，位于環(huán)狀軟骨水平的，稱為食管上括約??；位于食管下端，一部分在膈上，穿過膈孔，另一部分在膈下的高壓帶，稱為食管下括約肌。食管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。
英文名稱 | Human Esophageal Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 食管組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7129 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人食管平滑肌細(xì)胞
組織來源：食管組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人食管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人食管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21 | NLRP7： 富含亮酸重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh MCP-3/CCL7 單核細(xì)胞趨化蛋白3抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-TrK A.B.C/TrK /FITC 熒光素標(biāo)記酪激酶A.B.C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
TDP-43/TARDBP (tar DNA binding protein) Tar DNA 結(jié)合蛋白43抗原 0.5mg | Anti-Oct-4(Octamer-4) 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
Anti-GABA /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗γ1氨基抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLC34A2 0酸協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml |
Anti-PEPT1/FITC 熒光素標(biāo)記腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1/小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-Aromatase P450/FITC 熒光素標(biāo)記芳香化酶/細(xì)胞色素P450/P450抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
CSNK2A2 Others Human 人 CSNK2A2 / CK2A2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CD209B Others Mouse 小鼠 CD209B / DC-SIGNR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人顱骨造骨細(xì)胞裂解物HCOL | IL2RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL2RA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
SW 1353(人骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CBRH-7919(大鼠肝癌細(xì)胞) | CD83 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD83 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
ME-180(人子宮頸表皮癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 IL1RL1 / ST2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | IL17RC Others Human 人 IL17RC 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
T-102B酶-EDTA(含100mL酶解緩沖液)10mL | 人食管平滑肌原代細(xì)胞Anti-Oct-4(Octamer-4) 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Beijing/22808/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | EFNA5 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)(Fc 標(biāo)簽) |
膀胱上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | KLK13 Others Human 人 KLK13 / Kallikrein-13 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞 人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞，hFOB 1.19細(xì)胞 PIEC(豬髖動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞) | GABABR1： gamma基B型受體1抗體 0.2ml |
Human thrombin-antithrombin complex,TAT ELISA Kit 人合物Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | SIRPG Others Cynomolgus 食蟹猴 SIRPG / SIRP gamma / CD172g 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CD90抗體 Anti-Thy-1/CD90 0.1ml | M-AChR M3(Human music acetylcholine receptor M3) ELISA Kit 人毒蕈堿型乙酰受體亞型M3 96T |
ABH8： AlkB同源蛋白8抗體 0.2ml | CSNK2A2 Others Human 人 CSNK2A2 / CK2A2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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