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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人前列腺上皮采用先蛋白酶消化、后膠原酶-聯(lián)合消化并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人前列腺上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人前列腺上皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 前列腺 |
英文名稱 | Human Prostate Epithelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X7081 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
人前列腺上皮細(xì)胞分離自前列腺組織；前列腺（Prostate）是雄性的性腺器官；前列腺是不成對(duì)的實(shí)質(zhì)性器宮，由腺組織和肌組織構(gòu)成。前列腺如栗子，底朝上，與膀胱相貼，尖朝下，抵泌尿生殖膈，前面貼恥骨聯(lián)合，后面依直腸。前列腺腺體的中間有尿道穿過，扼守著尿道上口，所以，前列腺有問題時(shí)，排尿首先受影響。前列腺是機(jī)體非常少有的，具有內(nèi)、外雙重分泌功能的性分泌腺。作為外分泌腺，前列腺每天分泌前列腺液，是構(gòu)成精液主要成分；作為內(nèi)分泌腺，前列腺分泌的激素稱為“前列腺素"。前列腺上皮細(xì)胞與前列腺的功能關(guān)系密切，上皮細(xì)胞的損傷是前列腺炎的主要病癥，重度的前列腺炎患者的前列腺液內(nèi)可檢測(cè)到脫落的上皮細(xì)胞，這是上皮細(xì)胞損傷的標(biāo)志。炎癥發(fā)生時(shí)，與炎癥相關(guān)的一些炎癥因子可能發(fā)生變化。因此，體外培養(yǎng)前列腺上皮細(xì)胞是研究前列腺炎及前列腺上皮肉瘤等疾病的前提和基礎(chǔ)。前列腺主要特征如下：①前列腺結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)均受雄性激素的調(diào)控；②基底細(xì)胞主要表達(dá)高分子量細(xì)胞角蛋白（CK-5、CK-14），基底上皮細(xì)胞可分化成管腔上皮細(xì)胞；③前列腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)為研究前列腺的許多重要特性以及化學(xué)和激素性致癌作用提供了機(jī)會(huì)。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
CT-26.WT細(xì)胞，小鼠大腸癌細(xì)胞 CBRH-7919(大鼠肝癌細(xì)胞) 大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-2 | ASB7： 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族7抗體 0.2ml |
Anti-HMGA1 高遷移率族蛋白A1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ABCF3 三0酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白F亞基3抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-Phospho- Beta-Catenin (Ser675) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠0酸化β 連環(huán)素蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh IFABP 小腸型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
Leptin receptor(long) 瘦素受體(長)(抗原) 0.5mg | HCV Core protein： 丙肝病毒核心抗原C區(qū)抗體 0.1ml |
IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 0.1ml | Rhesus antibody Rh FAM13C1 FAM13C1蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
EFNB1 Protein Human 重組人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His 標(biāo)簽) | 人前列腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株;PC-3M IE8 |
FL62891細(xì)胞，人肝癌細(xì)胞 小鼠白血病克隆細(xì)胞系,L6565細(xì)胞 小耳豬肺細(xì)胞;SEP-L1 | MDA-MB-453(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
脂肪間質(zhì)干細(xì)胞 Adult adipose derived mesenchymal stem cells | SK-NEP-1(人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
人角膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | LEP Protein Human 重組人 Leptin 蛋白 |
SW038-C2細(xì)胞，人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 致病性大腸埃希氏菌 人間充質(zhì)干細(xì)胞-脂肪RNAHMSC-ad miRNA5 μg | 人前列腺上皮原代細(xì)胞Rhesus antibody Rh IFABP 小腸型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
大鼠胰島β細(xì)胞瘤細(xì)胞;RIN-m5F | FAP Others Human 人 FAP / Seprase 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
Y79細(xì)胞，人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤 球毛殼霉 小鼠肺腺癌細(xì)胞系;LA795 | 小鼠牙細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
Ishikawa, 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系 | Rhesus antibody Rh IgG 兔抗長爪沙鼠IgG 規(guī)格 1mg |
SP-A(Human Surfactant Protein A) ELISA Kit 人表面活性蛋白A 96T | 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A4 |
CD19(B-lymphocyte Anti-gen CD19 precursor) CD19(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg | GHRH(Human growth hormone releasing hormone) ELISA Kit 人促生長激素釋放激素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
MAGEA11： 黑色素瘤相關(guān)抗原11抗體 0.2ml | EFNB1 Protein Human 重組人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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