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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人膀胱移行上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人膀胱移行上皮經(jīng)Cytokeratin-AE1/AE3免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人膀胱移行上皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 膀胱組織 |
英文名稱 | Human Bladder Transitional Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X7255 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
人膀胱上皮細(xì)胞分離自膀胱組織；膀胱是一個儲尿器官，在哺乳類動物，它是由平滑肌組成的一個囊形結(jié)構(gòu)，位于骨盆內(nèi)，其后端開口與尿道相通。膀胱與尿道的交界處有括約肌，可以控制尿液的排出。膀胱壁由三層組織組成，由內(nèi)向外為黏膜層、肌層和外膜。肌層由平滑肌纖維構(gòu)成，稱為逼尿肌，逼尿肌收縮，可使膀胱內(nèi)壓升高，壓迫尿液由尿道排出。在膀胱與尿道交界處有較厚的環(huán)形肌，形成尿道內(nèi)括約肌。在括約肌收縮能關(guān)閉尿道內(nèi)口，防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分為三層：即漿膜層（蜂窩脂肪組織）、肌肉層（逼尿肌、膀胱三角區(qū)?。┖宛つ樱O薄的一層移行上皮組織）。其主要作用有：①組成過濾屏障內(nèi)壁的重要部分；②在炎癥和致血栓物質(zhì)的刺激合成必要的生物活性分子；③受損后影響系膜細(xì)胞和上皮細(xì)胞，進(jìn)而影響腎臟病變。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
BA/F3細(xì)胞，小鼠原B細(xì)胞 人浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞,CCD-1095Sk細(xì)胞 NeuroFectagen? 細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 | AGXT2L2： AGXT2L2蛋白抗體 0.2ml |
Anti-HIV-1 ENV (gp160) 艾滋病病毒-1包膜糖蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml | Rhesus antibody Rh ABCG5 三0酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員5抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-Phospho- Beta-Catenin (Ser33/37) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠0酸化β 連環(huán)素蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh IFI44 干擾素誘導(dǎo)蛋白44抗體 規(guī)格 0.2ml |
M2-PK ( pyruvate Kinase M2) 酸激酶-M2(抗原) 0.5mg | H5N1 Matrix Protein 2： A型病毒H5N1-M2蛋白抗體 1ml |
IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 0.1ml | Rhesus antibody Rh FAM154A FAM154A蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
非洲綠猴腎細(xì)胞;Vero E6 | MPC-83 胰腺腺泡細(xì)胞癌 |
IMR-32人母細(xì)胞瘤細(xì)胞 IMR-32 human neuroblastoma cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS | THPO Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
CM-M115小鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | C6(大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
腎動脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | IL6 Protein Human 重組人 IL6 / Ierleukin-6 蛋白 |
M2e細(xì)胞，人喉癌細(xì)胞 人腸系膜下腔動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞,Ealy926細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-E1 | 人膀胱移行上皮原代細(xì)胞Rhesus antibody Rh IFI44 干擾素誘導(dǎo)蛋白44抗體 規(guī)格 0.2ml |
人浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞;CCD-1095Sk | SCGB1A1 Others Human 人 SCGB1A1 / Uteroglobin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HepG2細(xì)胞，肝細(xì)胞癌 人T淋巴瘤細(xì)胞系,Hut-102細(xì)胞 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;NIH/3T3 | 小鼠肝外膽管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
HT-29, 人結(jié)腸癌細(xì)胞 | Rhesus antibody Rh IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 規(guī)格 0.1ml |
IFI16/p16(Mouse interferon-inducible protein 16) ELISA Kit 小鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16 96T | RH-35(大鼠肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
GSK-3 Beta, (Glycogen Synthase Kinase-3) 葡萄糖合成激酶-3(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg | TXB2(Human Thromboxane B2) ELISA Kit 人血栓素B2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
p95 NBS1： 細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白P95抗體 0.2ml | 非洲綠猴腎細(xì)胞;Vero E6 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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