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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人腦靜脈血管內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人腦靜脈血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人腦靜脈血管內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 腦靜脈組織 |
英文名稱 | Human Brain Venous Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X7376 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
人腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自腦靜脈組織；與腦動脈相比，腦靜脈管壁較薄。與身體其他部位的靜脈不同，腦靜脈管壁中沒有靜脈瓣，靜脈血的回流依賴高位的勢能。腦靜脈血的回流路徑可以歸納為：大部腦靜脈血經(jīng)腦深部靜脈和腦血竇流入頸內(nèi)靜脈醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理；小部腦靜脈血經(jīng)眼部翼狀靜脈叢，進(jìn)入靜脈導(dǎo)血管再到頭皮，后流入椎管中的椎旁靜脈系統(tǒng)。腦靜脈系統(tǒng)有大量交通枝靜脈叢，即使兩側(cè)頸內(nèi)靜脈都被阻塞，大腦靜脈血仍可經(jīng)椎靜脈和頸外靜脈系統(tǒng)完成其回流。腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的主要功能是維持血管內(nèi)外的動態(tài)平衡，合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)參與免疫反應(yīng)，維持凝血和纖溶的動態(tài)平衡。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
獼猴肺細(xì)胞;MML2 | ADAM8 ELISA Kit 大鼠解整合素樣金屬蛋白酶8 96T |
RNF169： 環(huán)指蛋白169抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh RAB40B RAS癌基因家族蛋白RAB40B抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-HCMV UL23/HHV5 UL23/FITC 熒光素標(biāo)記人巨細(xì)胞病毒UL23抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | CMTM2： 趨化素樣因子超家族成員2抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BRP44L 腦蛋白44樣蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-CT-R/FITC 熒光素標(biāo)記降鈣素受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
上皮細(xì)胞粘附分子/表皮細(xì)胞粘附分子抗體 Anti-EpCAM 0.2ml | Annexin A13： 膜粘連蛋白13抗體 0.2ml |
WM451, 人黑色素瘤細(xì)胞 | CL-0455TE671 subline No.2(人橫紋肌肉瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
人細(xì)胞;C-33A 大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | b16 小鼠黑色素瘤細(xì)胞 |
腸動脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 羅猴胎腎細(xì)胞;MA104 |
MouseS 小鼠皮膚成纖維樣細(xì)胞 | CL-0058CCRF-CEM(人急性淋巴白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
Hep G2細(xì)胞，肝癌細(xì)胞 人細(xì)胞(HPV-18永生化細(xì)胞),HeLa229細(xì)胞 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞cDNAHUMSC cDNA | 人腦靜脈血管內(nèi)皮原代細(xì)胞CMTM2： 趨化素樣因子超家族成員2抗體 0.2ml |
大鼠胰腺外分泌腺細(xì)胞;AR42J | 細(xì)胞名稱 M-37細(xì)胞 G-7(小鼠骨骼肌肌肉母瘤細(xì)胞) |
Li-7(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 SARS Spike S1 Subunit 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | MFC-GFP(小鼠前胃癌細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記)) 5×106cells/瓶×2 |
人羊膜細(xì)胞;HA | Rabbit Anti-IgG/APC APC標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GTP cyclohydrolase 1/GTP-CH-1 三0酸鳥苷環(huán)水解酶抗體 規(guī)格 0.2ml | 人前列腺癌細(xì)胞;LNCaP |
FAK： 粘著斑激酶抗體 0.1ml | Anti-Lamin B 核纖層蛋白B抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
TFPI(Mouse Tissue factor pathway inhibitor) ELISA Kit 小鼠組織因子途徑抑制物Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | WM451, 人黑色素瘤細(xì)胞 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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