詳細介紹
人結(jié)腸平滑肌原代細胞
人結(jié)腸平滑肌細胞分離自結(jié)腸組織;結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分,大部分固定于腹后壁,結(jié)腸的排列酷似英文字母“M",將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為:黏膜(上皮層、固有層、黏膜肌層),黏膜下層(疏松結(jié)締組織),肌層(內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑肌),外膜(纖維膜或漿膜)。結(jié)腸平滑肌細胞主要分布于黏膜肌層和肌層的內(nèi)環(huán)形、外縱行平滑??;結(jié)腸運動少而緩慢,對刺激的反應(yīng)也較遲緩。結(jié)腸平滑肌在食物消化與吸收、腸道運動和物質(zhì)分泌、誘發(fā)全身炎癥反應(yīng)以及細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等研究中起著重要的作用。結(jié)腸平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數(shù)細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網(wǎng)狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。結(jié)腸平滑肌運動活性受到遞質(zhì)、胃腸激素和藥物等因素的調(diào)節(jié)。隨著現(xiàn)代胃腸動力學(xué)研究的進展,對胃腸運動的研究已從器官、組織水平發(fā)展到細胞、分子水平,要求在胃腸道單個平滑肌細胞標本上來完成各種電生理、藥理和分子生物學(xué)等實驗。體外培養(yǎng)細胞,由于影響因素單一,是研究細胞功能以及相應(yīng)的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制的基礎(chǔ)。
英文名稱 | Human Colonic Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 結(jié)腸組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7149 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:人結(jié)腸平滑肌細胞
組織來源:結(jié)腸組織
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
方法簡介
公司實驗室分離的人結(jié)腸平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人結(jié)腸平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
1)復(fù)蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
原代骨細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝:5/2.5/1ml | Anti-TRP2 酪酶相關(guān)蛋白2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
Human Collagenase I ELISA Kit 人膠原酶I 96T | Anti-MKP-1/DUSP1/FITC 熒光素標記原活化蛋白激酶0酸酶-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TLK1 調(diào)節(jié)染色體組裝激酶1抗體 規(guī)格 0.1ml | TPO(Human Thyroid-Peroxidase) ELISA Kit 人甲狀腺過氧化物酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T |
HES1: 轉(zhuǎn)錄因子HES-1抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh CCDC117 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白117抗體 規(guī)格 0.2ml |
Factor H: 補體因子H抗體 0.1ml | ANG-2 ELISA Kit 大鼠血管生成素2Multi-class antibodies規(guī)格: 48T |
RK2 Others Canine 狗 kB / RK2 人細胞裂解液 (陽性對照) | HA Others H15N8 甲型流感 H15N8 (A/duck/AUS/341/1983) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人腦血管平滑肌細胞RNAHBCSMC miRNA5 μg | 小鼠條紋細胞(MN-s)(1×106) |
IL25 Others Mouse 小鼠 IL25 人細胞裂解液 (陽性對照) | HGF Others Mouse 小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 人細胞裂解液 (陽性對照) |
MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14) 5×106cells/瓶×2 CHO(中國倉鼠卵巢細胞) | HMEpC Pellet 人類上皮細胞團塊 > 1 mio.cells 人髓核細胞cDNAHNPC cDNA |
白牦牛皮膚細胞;Yak-2 | 人結(jié)腸平滑肌原代細胞TPO(Human Thyroid-Peroxidase) ELISA Kit 人甲狀腺過氧化物酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T |
小鼠心肌細胞(MCM)(1×106) QGY-7701, 人肝癌細胞 Human | CM-R072大鼠腎管狀上皮細胞培養(yǎng)基100mL |
人癌細胞;MDA-MB-468 | KB人口腔表皮樣癌細胞 KB human oral epidermoid carcinoma cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBSRPMI-1640(GIBCO)+10%FBS |
NA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Thailand/1(KAN-1)/2004) 酶 (Neuraminidase / NA) 人細胞裂解液 (陽性對照) | Anti-Proteasome 20S LMP7 /FITC 熒光素標記低分子質(zhì)量蛋白7抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
Oncostatin M: 抑瘤素M抗體 0.1ml | MMP9 Others Mouse 小鼠 MMP-9 人細胞裂解液 (陽性對照) |
SPNS1: SPNS1抗體 0.2ml | c20orf72: 20號染色體開放閱讀框72抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的驢抗人IgG 規(guī)格 0.1ml | RK2 Others Canine 狗 kB / RK2 人細胞裂解液 (陽性對照) |