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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的人骨髓成熟DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個核細胞、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
實驗室分離的人骨髓樹突狀經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細 胞 形態(tài)等綜合鑒定，純度可達80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人骨髓樹突狀原代細胞(成熟DC細胞) | 組織來源 | 骨髓 |
英文名稱 | Human Bone Marrow Maturation Dendritic Cells | 貨號 | YS-01X8291 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人骨髓樹突狀細胞分離自骨髓；骨髓是機體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用，白細胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細菌、病毒等；某些淋巴細胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細胞增多，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細胞是由骨髓單核細胞誘導而成的；樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞，典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長，在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落，細胞大而形態(tài)不規(guī)則，表面皺褶多，亦可見少量短刺狀突，胞內(nèi)細胞器豐富并可見吞噬泡，具有較強的遷移能力，伴隨有部分未誘導成的單核細胞，貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經(jīng)TNFα、LPS等誘導而成，多數(shù)呈懸浮生長， 細胞呈圓形，細胞體積進一步增大，表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 )，伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導致自發(fā)分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志，主要通過形態(tài)學、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子，進而激活T淋巴細胞，誘導免疫應答，處于啟動、調控、并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié)；未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應答，不能激活T細胞的第二信號，可導致T細胞無能，從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低，一般在30%以下。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：半貼壁半懸浮
細胞形態(tài)：圓形，樹突狀
傳代特性：屬于高度分化細胞；屬于不增殖細胞群
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人骨髓樹突狀細胞(成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
原代上皮細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml | GSK ELISA Kit 大鼠糖原合成酶激酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
C1orf177： 1號染色體開放閱讀框177抗體 0.2ml | phospho-GSK-3 Beta(Thr390)： 0酸化糖原合酶激酶3β抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh Ceruloplasmin 銅藍蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | PCGF1： 表觀抑制因子Polycomb家族成員PCGFl蛋白抗體 0.2ml |
Anti-CD335/NKp46/NCR1/FITC 熒光素標記細胞毒性受體NK-p46抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | GLP-1 peptide 胰高血糖素樣肽-1(多肽) 0.1mg |
Rabbit Anti-Meiiones Unguiculataus Milme-Edwauds/FITC 熒光素標記兔抗長爪沙鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml | Mkl1： myocardin相關轉錄因子抗體 0.2ml |
BTK Others Human 人 Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | HBZY-1(大鼠腎小球系膜細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0369IR983F(大鼠骨髓瘤細胞)5×106cells/瓶×2 SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-1 |
人尿道上皮細胞RNAHUC miRNA5 μg | FLT3LG Others Mouse 小鼠 FLT3L / Flt3 ligand 人細胞裂解液 (陽性對照) |
PDPN Others Human 人 PDPN / Podoplanin 人細胞裂解液 (陽性對照) | EPHA4 Others Rat 大鼠 EphA4 人細胞裂解液 (陽性對照) |
LLC-WRC 256(大鼠腹水癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CHL/IU [ CHL-11 ](中國倉鼠肺細胞) | OVAC細胞，人卵巢癌細胞 猴腎C細胞,M145細胞 視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
扁桃體上皮細胞生長添加物TEpiCGS | 人骨髓樹突狀原代細胞(成熟DC細胞)PCGF1： 表觀抑制因子Polycomb家族成員PCGFl蛋白抗體 0.2ml |
SK-N-SH, 人母細胞瘤細胞 低轉移肺癌細胞,96-C細胞 PLC/PRF/5(肝癌亞力山大細胞) | 人滑膜細胞HS |
小鼠單核巨噬細胞;J774A.1 | FZD4 Others Rat 大鼠 Frizzled-4 / FZD4 人細胞裂解液 (陽性對照) |
HHpC-c 人肝細胞(HHpC) 3-6 mio. 人支氣管平滑肌細胞HBSMC | Anti-phospho-IKK beta (Tyr466) /FITC 熒光素標記0酸化核因子κB激酶beta抑制劑抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-Reprimo 細胞質內(nèi)的糖基化蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml | Caco-2細胞，結腸腺癌細胞 鼠胸腺激酶缺陷細胞株,L-M TK細胞 人細胞;Hela P10s-11F |
Rhesus antibody Rh phospho-IRS1(Ser332/336) 0酸化胰島素受體底物-1抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KLHL31 Kelch樣蛋白31抗體 規(guī)格 0.2ml |
FSH 促卵泡生成素 96T | BTK Others Human 人 Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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