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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肺大動(dòng)脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肺大動(dòng)脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 人肺大動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 肺動(dòng)脈組織 |
英文名稱(chēng) | Human Pulmonary Great Artery Endothelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X6999 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人肺大動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自肺大動(dòng)脈組織；肺大動(dòng)脈亦稱(chēng)肺動(dòng)脈干。在呼吸空氣的脊椎動(dòng)物中，把靜脈血由心臟導(dǎo)向肺臟的動(dòng)脈。肺大動(dòng)脈起于右心室，在主動(dòng)脈之前向左上后方斜行，在主動(dòng)脈弓下方分為左、右肺動(dòng)脈，經(jīng)肺門(mén)入肺。肺動(dòng)脈干位于心包內(nèi)，為一粗短的動(dòng)脈干。起自右心室，在升主動(dòng)脈前方向左后上方斜行，至主動(dòng)脈弓下方分為左、右肺動(dòng)脈。左肺動(dòng)脈較短，在左主支氣管前方橫行，分二支進(jìn)入左肺上、下葉。右肺動(dòng)脈較長(zhǎng)而粗，經(jīng)升主動(dòng)脈和上腔靜脈后方向右橫行，至右肺門(mén)處分為三支進(jìn)入右肺上、中、下葉。細(xì)胞呈單層多角形鋪路石狀分布；該細(xì)胞在維持血管內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡、合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)、維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡中起重要作用。肺大動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞呈單層多角形鋪路石狀分布，該細(xì)胞在維持血管內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡、合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)、維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡中起重要作用。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
小鼠肝癌細(xì)胞;Hepa 1-6 [Hepa1-6] 小鼠胰腺星狀細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | ANT-1： 腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 0.1ml |
Anti-HDAC12 組蛋白去乙?；?span>12抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ABL2 ABL2蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml |
Anti-Caspase-6 (NT)/FITC 熒光素標(biāo)記半胱胺酸蛋白酶蛋白-6抗體(N端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh IFN-Alpha/IFNA1/IFNA13/Interferon alpha 1 干擾素α抗體 規(guī)格 0.1ml |
ASCL1/MASH1(Achaete-scute homolog 1) 母細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)移因子抗原 0.5mg | HSPB7： 熱休克蛋白β7抗體 0.2ml |
IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗人IgM 0.1ml | Rhesus antibody Rh FAM3C/ILEI 上皮分泌型FAM3C蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
人間充質(zhì)干細(xì)胞-臍帶 Human | NCI-H358 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 |
LX-2, 人肝星形細(xì)胞株 | 人臍靜脈平滑肌細(xì)胞 |
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H209 | 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞;NK-92 [NK92] |
CM-M059小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KM9401 |
貓腎細(xì)胞;CRFK 人胚腎細(xì)胞,293[HEK-293]細(xì)胞 Fox-NY細(xì)胞，小鼠骨髓瘤細(xì)胞 | 人肺大動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞Rhesus antibody Rh IFN-Alpha/IFNA1/IFNA13/Interferon alpha 1 干擾素α抗體 規(guī)格 0.1ml |
人腦瘤細(xì)胞;SF17 | EDA2R Others Rat 大鼠 XEDAR / EDA2R 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
UMR-106大鼠骨肉瘤細(xì)胞 Osteosarcoma cells in UMR-106 rats DMEM培養(yǎng)基+10%FBS | 酶(含10mL 酶解緩沖液) 1mL |
EC109，人食管癌細(xì)胞 | Rhesus antibody Rh IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 規(guī)格 0.1ml |
Gzms-B(Mouse granzymes B) ELISA Kit 小鼠顆粒酶B 96T | IL8 Protein Human 重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 1-77) |
PSD-95 突觸后密度蛋白95(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg | AChRab(Human acetylcholine receptor antibody) ELISA Kit 人乙酰受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
MBNL3： 毒蕈堿樣蛋白3抗體 0.2ml | 人間充質(zhì)干細(xì)胞-臍帶 Human |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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