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詳細(xì)介紹
人大隱靜脈平滑肌原代細(xì)胞
人大隱靜脈平滑肌細(xì)胞分離自大隱靜脈；大隱靜脈起于足背靜脈弓內(nèi)側(cè)端，經(jīng)內(nèi)踝前方，沿小腿內(nèi)側(cè)緣伴隱上行，經(jīng)股骨內(nèi)側(cè)髁后方，進(jìn)入大腿內(nèi)側(cè)部，與股內(nèi)側(cè)皮伴行，逐漸向前上，在恥骨結(jié)節(jié)外下方穿隱靜脈裂孔，匯入股靜脈，其匯入點(diǎn)稱為隱股點(diǎn)。有5條屬支：旋髂淺靜脈、腹壁淺靜脈、外靜脈、股內(nèi)側(cè)淺靜脈和股外側(cè)淺靜脈，它們匯入大隱靜脈的形式多樣，相互間吻合豐富。大隱靜脈曲張行高位結(jié)扎時(shí)，須分別結(jié)扎、切斷各屬支，以防復(fù)發(fā)。大隱靜脈平滑肌細(xì)胞主要功能：①血管平滑肌細(xì)胞的生長(zhǎng)潛力是原發(fā)血管病發(fā)的重要異常因素；②參與血管壁的炎癥反應(yīng)，并與血管疾病的進(jìn)展和穩(wěn)定有關(guān)。因此，研究大隱靜脈平滑肌細(xì)胞的代謝和信號(hào)通路是研究大隱靜脈擴(kuò)張等疾病的良好實(shí)驗(yàn)材料。大隱靜脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。
英文名稱 | Human Great Saphenous Vein Smooth Muscle Cells | 組織來(lái)源 | 大隱靜脈組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7300 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人大隱靜脈平滑肌細(xì)胞
組織來(lái)源：大隱靜脈組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人大隱靜脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人大隱靜脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
雜交瘤(B類);Z1510C6D10F4G6 | Alpha-GST ELISA Kit 大鼠αS轉(zhuǎn)移酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
C1ORF190： 1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框190抗體 0.2ml | GCNT1： GCNT1葡萄糖轉(zhuǎn)移酶抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh CG6856/CG6856-PA 果蠅CG6856-PA抗體 規(guī)格 0.5ml | Progestin Receptor Beta： 孕激素受體β(MPRβ)抗體 0.2ml |
Anti-NKR/Neurokin B receptor /FITC 熒光素標(biāo)記激肽-B受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Glypican 4(Glypican proteoglycan 4) 0脂?；嫉鞍拙厶?span>-4抗原 0.5mg |
IgM/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗羊IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml | MIA2： 黑色素瘤抑制活性蛋白2抗體 0.2ml |
PLAC9 Others Human 人 PLAC9 / Placea-specific 9 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | SHG-44 (人膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5 | FANCA Others Human 人 FANCA / FACA 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
KATO III(人胃癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 敗毒梭菌Closidium septicum | C1QB Others Human 人 C1QB / C1qB 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
ERBB2 Others Rhesus 恒河猴 ErbB2 / HER2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | SNU-182細(xì)胞，人肝癌細(xì)胞 穩(wěn)定表達(dá)EBNA1的人胚腎細(xì)胞,293E細(xì)胞 外周血白細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 人大隱靜脈平滑肌原代細(xì)胞Progestin Receptor Beta： 孕激素受體β(MPRβ)抗體 0.2ml |
BV-2小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞 Microglial cells of BV-2 mice 1640+20%FBS | 人虹膜色素上皮細(xì)胞cDNAHIPEpiC cDNA |
HSC-T6 大鼠肝星形細(xì)胞 | HA Others H4N4 甲型流感 H4N4 (A/mallard duck/Alberta/299/1977) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
IL13 Others Cynomolgus 食蟹猴 IL-13 / Ierleukin-13 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | Anti-phospho-IKK alpha (Thr23) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化核因子κB激酶alpha抑制劑抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-Phospho-Ret (Tyr1062) 0酸化指狀蛋白RET抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml | 雜交瘤(B類);IB3C10H12A12G2H8F3 小鼠視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
Rhesus antibody Rh Phospho-NFKBIB (Ser23) 0酸化KB抑制蛋白β抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KLK1 1抗體 規(guī)格 0.1ml |
G-CSF (Rabbit Granulocyte Colony Stimulating Factor) ELISA Kit 兔粒細(xì)胞集落刺激因子 96T | PLAC9 Others Human 人 PLAC9 / Placea-specific 9 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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