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詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人表皮黑色素細胞先蛋白酶消化、后-膠原酶混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的人表皮黑色素經S-100免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 人表皮黑色素原代細胞 | 組織來源 | 皮膚組織 |
英文名稱 | Human Epidermal Melanocyte Cells | 貨號 | YS-01X7349 |
產品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人表皮黑色素細胞分離自皮膚組織；表皮位于動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結構，由復層扁平上皮構成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質層。黑色素細胞是皮膚產生和維持色素的主要細胞，起源于嵴，后逐漸遷移到表皮和毛囊。黑色素細胞的異常或功能的失常導致了一系列難治性色素性疾病的發(fā)生，如、黃褐斑等。表皮黑色素細胞主要分布于位于表皮的基底層，與表皮細胞共同組成表皮黑素單位，其主要功能是產生黑素小體保護皮膚免受損害。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產品：
雜交瘤(B類);Z172A4C4C6F3G12 | Anti-Telomerase Binding Protein, P23 端粒酶結合蛋白P23抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
Try- II (Human Trypsinogen-2) ELISA Kit 人酶原Ⅱ 96T | Anti-Midnolin isoform Protein 2/FITC 熒光素標記中腦核仁蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TLS/FUS 粘液樣脂肪肉瘤蛋白FUS1抗體 規(guī)格 0.2ml | Gzms-A(Human granzymes A) ELISA Kit 人顆粒酶AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
HE4： 附睪分泌蛋白4抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh CCDCA 卷曲螺旋結構域蛋白A抗體 規(guī)格 0.2ml |
FBXL16： FBXL16蛋白抗體 0.2ml | FASL ELISA Kit 大鼠凋亡相關因子配體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
心房成纖維細胞 (HCFaa)( 5×105 ) | FCGR2B Others Human 人 CD32b / FCGR2B 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人胚肺成纖維細胞;MRC-5 | PGA4 Others Human 人 PGA4 / Pepsinogen A 人細胞裂解液 (陽性對照) |
NCI-H661(人大細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 腎上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | TF Others Rat 大鼠 ansferrin / TF 人細胞裂解液 (陽性對照) |
TGFBR1 Others Human 人 TGFBR1 / ALK-5 / SKR4 人細胞裂解液 (陽性對照) | SK-N-BE(2) (人母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 U937(組織細胞淋巴瘤) |
成骨細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 人表皮黑色素原代細胞Gzms-A(Human granzymes A) ELISA Kit 人顆粒酶AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
COS-7(非洲綠猴SV40轉化的腎細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0182P815(小鼠肥大細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2 正常大鼠腎細胞;NRK | CM-R024大鼠淋巴成纖維細胞培養(yǎng)基100mL |
BTC Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 BTC / Betacellulin 蛋白 (Fc 標簽) | NB4細胞，人急性早幼粒白血病細胞 綠色熒光蛋白標記小鼠前胃癌細胞,MFC-GFP細胞 成纖維細胞培養(yǎng)基FM-sf-prf |
PTN Others Mouse 小鼠 Pleioophin / PTN / HB-GAM 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | Anti-Phospho-Rb (Ser807/Ser811)/FITC 熒光素標記0酸化視網膜母細胞瘤相關蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Orexin B： 增食欲素B/欲激素B 0.1ml | SELL Others Mouse 小鼠 SELL / CD62L / L-selectin 人細胞裂解液 (陽性對照) |
Squalene Epoxidase： 鯊烯環(huán)氧酶抗體 0.2ml | CRHBP： 促腎上腺皮質激素釋放激素結合蛋白抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG/Bio 標記的驢抗兔IgG 規(guī)格 0.1ml | 心房成纖維細胞 (HCFaa)( 5×105 ) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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