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细胞属性：

方法简介

公司实验室分离的大鼠脑静脉血管内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠脑静脉血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

细胞简介：

大鼠脑静脉血管内皮细胞分离自脑静脉组织；与脑动脉相比，脑静脉管壁较薄。与身体其他部位的静脉不同，脑静脉管壁中没有静脉瓣，静脉血的回流依赖高位的势能。脑静脉血的回流路径可以归纳为：大部脑静脉血经脑深部静脉和脑血窦流入颈内静脉医|学教育网搜集整理；小部脑静脉血经眼部翼状静脉丛，进入静脉导血管再到头皮，最后流入椎管中的椎旁静脉系统。脑静脉系统有大量交通枝静脉丛，即使两侧颈内静脉都被阻塞，大脑静脉血仍可经椎静脉和颈外静脉系统完成其回流。脑静脉血管内皮细胞的主要功能是维持血管内外的动态平衡，合成和分泌细胞因子和介质参与免疫反应，维持凝血和纤溶的动态平衡。

培养信息：

?包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作步骤：

1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。

5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。

6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。

8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。

9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。

10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。

11. 镜检观察。

公司产品：

兔血管生成素2(ANG-2)ELISA 试剂盒

Oxidized low density lipoprotein aibody against rat (OLAb) ELISA Kit 大鼠氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)试剂盒

HumanLeishimariaaibodyELISAKit 人利什曼原虫抗体(LeishimariaAb)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanFreeTestoterone,F-TESTO试剂盒人游离睾同(F-TESTO)试剂盒规格：96T/48T

组织半胱蛋白酶-3(CASPASE-3)活性荧光定量试剂盒20次

HumanNeural-Cadherin,N-CadELISAKit人N钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)试剂盒规格：96T/48T

猪促卵泡素(FSH)ELISA 试剂盒

Human macrophage inflammatory protein 1 beta (MIP-1 beta /CCL4) ELISA Kit 人巨噬细胞性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)试剂盒

PorcineEsogen,EELISAKit 猪雌激素(E)试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlphaManase(MouseAlphamannosidase)ELISAKit小鼠α甘露糖苷酶

血液0酸二酯酶4(PDE4)活性酶连续循环光谱法定量试剂盒20次

Mouseα-L-iduronidase,IDUAELISAKit小鼠αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)试剂盒

兔子端粒酶(TE)ELISAKit   ELISA. 

兔子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISAKit   ELISA. 

兔子促上腺皮质激素(ACTH)ELISAKit   ELISA.

CHEK1重组小鼠 CHK1 / CHEK1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱγ(CAMK2γ)重组蛋白 Recombinant Calcium/Calmodulin Dependent Protein Kinase II Gamma (CAMK2g)

BCL2L12重组人 BCL2L12 / BCL2-like 12 蛋白 (GST 标签) Protein

IRAK4 Protein Human 重组人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白

CXCL12 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (Fc 标签)

CL-0238U-87 MG(人神经胶质瘤细胞)  孔雀绿0酸盐检测试剂盒MGmP  小鼠成纤维细胞(EGFP标记) 人肺癌细胞，SW 900[SW-900; SW900]细胞 P3X63Ag8(骨髓瘤细胞)  肝内胆管上皮细胞Many   Hep-2   人喉表皮癌细胞 小鼠原代小肠隐窝上皮细胞 小鼠原代肾脏巨噬细胞

大鼠脑静脉血管内皮原代细胞MAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原 0.5mgMAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原)

IL1R2 Protein Human 重组人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白

TNFSF12重组食蟹猴 / 人 TNFSF12 蛋白 (Fc 标签) Protein

MERTK Protein Mouse 重组小鼠 MERTK / Mer 蛋白 (His & GST 标签)

TPH1重组人 Tryptophan Hydroxylase 1 / TPH1 蛋白 Protein