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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的大鼠結腸成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的大鼠結腸成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠結腸成纖維原代細胞 | 組織來源 | 結腸 |
英文名稱 | Rat Colonic Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X8237 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
大鼠結腸成纖維細胞分離自結腸組織；結腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結腸分升結腸、橫結腸、降結腸和乙狀結腸4部分，大部分固定于腹后壁，結腸的排列酷似英文字母“M"，將小腸包圍在內(nèi)。結腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結締組織），肌層（內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑肌），外膜（纖維膜或漿膜）。結腸成纖維細胞主要分布于外膜（纖維膜或漿膜）結締組織內(nèi)。成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的結腸成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
培養(yǎng)信息：
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
大鼠結腸成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)試劑盒 ，英文名： IL1Ra ELISA Kit
Human ubiquitin activating enzyme (E1/UBAE) ELISA Kit 人泛素激活酶(E1/UBAE)試劑盒
rabbitIerleukin4,IL-4ELISAKit 兔子白介素4(IL-4)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforBeta-CG(MouseChorionicGonadoophinBeta)ELISAKit小鼠絨毛膜β
細菌乙醇比色法定量試劑盒20次
Rabbitglialfibrillaryacidicprotein,GFAPELISAKit兔子神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)試劑盒規(guī)格：96T/48T
豬白介素4(IL-4)ELISA 試劑盒
Human ai IgA aibody (ai-IgA-Ab) ELISA Kit 人抗IgA抗體(ai-IgA-Ab)試劑盒
Porcineplasminogenactivatorinhibitor1,PAI-1ELISAKit 豬纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforALCAM(HumanActivatedLeukocyteCellAdhesionMolecule)ELISAKit人白細胞活化黏附因子
血液逆轉錄酶(REVERSEANSCREPTASE)活性熒光定量試劑盒20次
MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor,VEGFR-3/Flt-4ELISAKit小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子受體-3(VEGFR-3/Flt-4)試劑盒
人脂0壁酸試劑盒 人脂0壁酸試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 人脂0壁酸試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人脂0壁酸試劑盒、人脂0壁酸試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。
人脂聯(lián)素試劑盒 人脂聯(lián)素試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 人脂聯(lián)素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人脂聯(lián)素試劑盒、人脂聯(lián)素試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。
人脂肪細胞型脂肪酸結合蛋白試劑盒 人脂肪細胞型脂肪酸結合蛋白試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 人脂肪細胞型脂肪酸結合蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人脂肪細胞型脂肪酸結合蛋白試劑盒、人脂肪細胞型脂肪酸結合蛋白試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。
人脂肪酸結合蛋白試劑盒 人脂肪酸結合蛋白試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 人脂肪酸結合蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人脂肪酸結合蛋白試劑盒、人脂肪酸結合蛋白試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。
SELL重組小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 Protein
CD31 (PECAM-1 0.5mgCD31 (PECAM-1) 血小板內(nèi)皮細胞黏附分子-1(抗原)
CCL11重組人 CCL11 蛋白 Protein
ISG15 Protein Human 重組人 ISG15 / G1P2 蛋白
SELP Protein Rat 重組大鼠 SELP / P Selectin 蛋白 (Fc 標簽)
CD8A Others Ferret 雪貂 CD8A / CD8 alpha chain 人細胞裂解液 PANC-1人胰腺癌細胞 Human pancreatic cancer cell line PANC-1 豹貓皮膚成纖維樣細胞;LCS5 心臟微血管內(nèi)皮細胞cDNAHCMEC cDNA 小鼠原代胰腺導管上皮細胞 鴨原代肝間質(zhì)細胞
大鼠結腸成纖維原代細胞ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin 0.1mgShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Gln11) ?？窠?jīng)毒素(35肽)
IL5 Protein Human 重組人 IL5 / Interleukin 5 蛋白
HA重組甲型流感 H5N1 (A/duck/Laos/3295/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein
LXN Protein Human 重組人 Latexin / LXN / TCI 蛋白
SERPINF1重組人 SerpinF1 / PEDF 蛋白 Protein
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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