大鼠海綿體內(nèi)皮原代細胞

大鼠海綿體內(nèi)皮細胞分離自海綿體組織；陰莖海綿體是由海綿狀的小梁和腔隙構(gòu)成的血竇結(jié)構(gòu)，它主要包括海綿體內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞和成纖維細胞3種細胞成分。其中平滑肌細胞和成纖維細胞鑲嵌于海綿體細胞外基質(zhì)的膠原中，而海綿體內(nèi)皮細胞則覆蓋于海綿體血竇的腔面，僅占海綿體組織的2.8%。在消化海綿體組織時，膠原酶的作用主要是松解海綿體內(nèi)皮細胞與基膜的聯(lián)系，破壞海綿體內(nèi)皮細胞間的緊密連接。如果消化時間延長或膠原酶濃度過大，平滑肌細胞和成纖維細胞也將被消化下來，從而影響海綿體內(nèi)皮細胞的純度。因此，比較篩選合適的膠原酶濃度和消化時間是成功分離海綿體內(nèi)皮細胞的關(guān)鍵。

產(chǎn)品名稱：大鼠海綿體內(nèi)皮細胞

組織來源：海綿體組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠海綿體內(nèi)皮采用混合酶消化法結(jié)合機械分離法、并用內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠海綿體內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

小鼠α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)ELISA 試劑盒

Human vitamin E (VE) ELISA Kit 人(VE)試劑盒

Humanplacetallactogen,PLELISAKit 人胎盤泌乳素(PL)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humancholineacetylase,CHAc試劑盒人乙?；?span>(CHAc)試劑盒規(guī)格：96T/48T

總RNA樣品mRNA選擇化試劑盒10次

humanschistosomaELISAKit人血吸蟲(schistosoma)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物A(VA)ELISA 試劑盒

Human ai nuclear aibody (ANA) ELISA Kit 人抗核抗體(ANA)試劑盒

Porcineplateletactivatingfactor,PAFELISAKit 豬血小板活化因子(PAF)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforaFGF-1(Humanacidicfibroblastgrowthfactor1)ELISAKit人酸性成纖維細胞生長因子1

血液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1(ACE1)活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)定量試劑盒20次

MouseterminalcomplemecomplexC5b-9,TCCC5b-9ELISAKit小鼠末端補體復(fù)合物C5b-9(TCCC5b-9)試劑盒

直鏈淀粉   250mg

Amylose,fromPotato   1g

抗蛋白酶   250mg

Aipain,Dihydrochloride   1g

IL1RAPL1重組人 IL-1R8 / IL1RAPL1 蛋白 Protein

抑制素βE(INHβE)重組蛋白 Recombinant Inhibin Beta E (INHbE)

HA重組甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

IL17RA Protein Human 重組人 IL17RA / CD217 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

GFP Protein Aequorea victoria 重組水母 GFP 蛋白

C6大鼠膠質(zhì)瘤細胞 C6 rat glioma cell DMEM+10% FBS  小鼠小梁網(wǎng)細胞   蚊子幼蟲體細胞;Aedes albopictus clone C6/36 人肺癌細胞，NCI-H1299細胞 A-431(表皮癌細胞)  中國倉鼠肺細胞;V79  COS-7 非洲綠猴SV40 小鼠原代子宮平滑肌細胞 兔原代中耳上皮細胞

大鼠海綿體內(nèi)皮原代細胞BCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein 0.5mgBCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein) 癌耐藥相關(guān)蛋白(抗原)

IL1RL1 Protein Human 重組人 IL1RL1 / ST2 蛋白 (isoform a, His 標(biāo)簽)

MDGA2重組小鼠 MDGA2 / MAMDC1 蛋白 Protein

CD40LG Protein Rat 重組大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

LRP10重組人 LRP10 蛋白 Protein

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。