詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠關(guān)節(jié)囊成纖維采用混合酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠關(guān)節(jié)囊成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠關(guān)節(jié)囊成纖維原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 關(guān)節(jié)囊 |
英文名稱 | Rat Articular Capsule Fibroblast Cells | 貨號(hào) | YS-01X8234 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
大鼠關(guān)節(jié)囊成纖維細(xì)胞分離自關(guān)節(jié)囊組織;關(guān)節(jié)囊(articular capsule)是由結(jié)締組織構(gòu)成的膜囊,附著于關(guān)節(jié)的周?chē)?,密封關(guān)節(jié)腔。關(guān)節(jié)囊的壁共有兩層:外層為纖維層;內(nèi)層為滑膜層。纖維層實(shí)際上是一個(gè)連結(jié)骨的骨膜向另一骨骨膜的移行。纖維層厚而堅(jiān)韌,由致密結(jié)締組織構(gòu)成,含有豐富的血管和神經(jīng)。其淺層纖維多呈縱行排列;深層纖維主要為環(huán)行纖維。纖維層的厚薄,各個(gè)關(guān)節(jié)不相同,即是在同一關(guān)節(jié)中,各部也不一致一般在運(yùn)動(dòng)范圍小的或是負(fù)重較大的關(guān)節(jié)中,都較厚而緊張,相反,于運(yùn)動(dòng)靈活的關(guān)節(jié),則較薄而松弛。有的關(guān)節(jié)囊的部分纖維囊缺如,僅一層滑膜層;有的部分明顯增厚,形成韌帶?;颖《釢?rùn),是由疏松結(jié)締組織構(gòu)成,襯在纖維層內(nèi)面,周緣附著在關(guān)節(jié)軟骨的邊緣。它朝向關(guān)節(jié)腔的內(nèi)面光而發(fā)亮,此面上蓋有一層內(nèi)皮細(xì)胞。滑膜向關(guān)節(jié)腔分泌滑液,滑液是稍粘稠而透明的液體,可減少關(guān)節(jié)中相連骨的摩擦,是一種滑潤(rùn)劑。滑膜表面可形成絨毛或皺襞突入關(guān)節(jié)腔內(nèi)。有時(shí)滑膜層可以穿過(guò)纖維層呈囊狀向外膨出,形成滑膜囊,常位于肌腱與骨面之間。有時(shí)滑膜層突出不明顯,僅呈深窩狀,稱為囊狀隱窩。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái);成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開(kāi)始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長(zhǎng),不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長(zhǎng),平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:基礎(chǔ)培養(yǎng)基,含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
大鼠關(guān)節(jié)囊成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
操作步驟:
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品:
小鼠β甘露糖苷酶(β Manase)ELISA 試劑盒
Human vitamin C (VC) ELISA Kit 人C(VC)試劑盒
Humancalmodulin,CAMELISAKit 人鈣調(diào)素(CAM)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanchemerin試劑盒人chemerin試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉(zhuǎn)基因玉米NK603品系試劑盒20次
Humanserineprotease,PRSSELISAKit人絲蛋白酶(PRSS)試劑盒規(guī)格:96T/48T
豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP8)試劑盒 ,英文名: MMP8 ELISA Kit
Human calcineurin (CaN) ELISA Kit 人鈣調(diào)0酸酶(CaN)試劑盒
rabbitEndothelin1,ET-1ELISAKit 兔子內(nèi)皮素1(ET-1)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforBACE2(Humanbeta-siteAPP-cleavingenzyme2)ELISAKit人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2
線蟲(chóng)二環(huán)氧丁烷(diepoxybane)誘導(dǎo)突變?cè)噭┖?span>10次
Rabbitcardiacisoformofopni,cELISAKit兔心肌特異性肌鈣蛋白T(c)試劑盒規(guī)格:96T/48T
人組酸豐富糖蛋白(HRG)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human HRG (Histidine Rich Glycoprotein) ELISA Kit
人乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human HSPG (Heparan Sulfate Proteoglycan) ELISA Kit
人膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human ANXA5 (Annexin A5) ELISA Kit
人HA絲酸肽酶1(HA1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human HA1 (HA Serine Peptidase 1) ELISA Kit
IFNG重組大鼠 IFNG / Interferon Gamma 蛋白 Protein
GRP( Gastrin Releasing Peptide 0.5mgGRP( Gastrin Releasing Peptide ) 促胃泌素釋放肽(抗原)
FETUB重組人 Fetuin-B / FETUB 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
ABHD14B Protein Human 重組人 ABHD14B 蛋白 (His 標(biāo)簽)
CD83 Protein Mouse 重組小鼠 CD83 / HB15 蛋白 (His 標(biāo)簽)
C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞(L929-TK-);LTK- JEC, 人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞系 tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞(B類);Pan02-CAG-tTA-4C5 FRhK-4恒河猴胚腎細(xì)胞 FRhK-4 Ganges RIver monkey embryo kidney cell DMEM+10%FBS 鴨原代腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 小鼠原代胃cajal間質(zhì)細(xì)胞
大鼠關(guān)節(jié)囊成纖維原代細(xì)胞ACTH (Adrenorticotrophin hormons 0.2mgACTH (Adrenorticotrophin hormons)(7-23) 促腎上腺皮質(zhì)激素(7-23)(抗原)
IL21 Protein Human 重組人 Interleukin-21 / IL-21 蛋白
CXCL2重組小鼠 CXCL2 / GRO2 / MIP-2 蛋白 (His & SUMO 標(biāo)簽) Protein
EDA2R Protein Rat 重組大鼠 XEDAR / EDA2R 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
ADAMTSL1重組人 ADAMTSL1 / PUNCTIN 蛋白 Protein