大鼠肺動脈平滑肌原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代角膜上皮細(xì)胞 BRL-3A(大鼠正常肝細(xì)胞) COLO 205 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 1ml/T75 G422瘤 神經(jīng)膠質(zhì)瘤 B16-F10, 小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 Mouse 小鼠原代心肌成纖維細(xì)胞

大鼠肺動脈平滑肌原代細(xì)胞

大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞分離自肺動脈組織；肺動脈亦稱肺動脈干。在呼吸空氣的脊椎動物中，把靜脈血由心臟導(dǎo)向肺臟的動脈。肺動脈起于右心室，在主動脈之前向左上后方斜行，在主動脈弓下方分為左、右肺動脈，經(jīng)肺門入肺。肺動脈干位于心包內(nèi)，為一粗短的動脈干。起自右心室，在升主動脈前方向左后上方斜行，至主動脈弓下方分為左、右肺動脈。左肺動脈較短，在左主支氣管前方橫行，分二支進(jìn)入左肺上、下葉。右肺動脈較長而粗，經(jīng)升主動脈和上腔靜脈后方向右橫行，至右肺門處分為三支進(jìn)入右肺上、中、下葉。肺動脈平滑肌細(xì)胞是肺血管的重要結(jié)構(gòu)細(xì)胞之一，在調(diào)控肺血管的收縮和舒張功能中有重要作用。肺動脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。肺動脈平滑肌細(xì)胞的異常是肺動脈高壓發(fā)生發(fā)展的重要病理學(xué)特征，其凋亡和增殖失衡是肺血管重塑的關(guān)鍵。研究表明，急性和慢性缺氧均可導(dǎo)致肺動脈高壓，即缺氧性肺動脈高壓，推斷缺氧可能是通過促進(jìn)肺動脈平滑肌細(xì)胞的增殖而參與缺氧性肺動脈高壓的發(fā)生發(fā)展。肺動脈平滑肌細(xì)胞主要功能：①細(xì)胞表面表達(dá)介質(zhì)（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應(yīng)；②是多數(shù)重要動脈疾病的靶細(xì)胞。肺動脈平滑肌細(xì)胞與主要病生理變化：①平滑肌增生易致肺動脈高壓；②先天性肺動脈狹窄；③肺動脈栓塞。

產(chǎn)品名稱：大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞

組織來源：肺動脈

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡介

實驗室分離的大鼠肺動脈平滑肌采用蛋白酶 - 膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的大鼠肺動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

小鼠內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA 試劑盒

People of coicosterone / coicosterone (CO) ELISA Kit 人皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CO)試劑盒

HumanAcylationStimulatingProtein,ASPELISAKit 人?；碳さ鞍?span>(ASP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Human8-isoprostaglandin,8-iso-PG試劑盒人8異前列腺素(8-iso-PG)試劑盒規(guī)格：96T/48T

正常大鼠(SpragueDawley)腎組織微粒體組分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-IgEreceptoraibodyELISAKit小鼠抗IgE受體抗體試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬膽囊收縮素/腸促肽(CCK)ELISA 試劑盒

Human macrophage colony stimulating factor (M-CSF) ELISA Kit 人巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)試劑盒

Porcinemelanomametastasissurfaceadhesionmolecule,MMSAMELISAKit 豬黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAlpha1-MGELISAKit大鼠α1微球蛋白

血液0酸二酯酶1(PDE1)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量試劑盒10次

Mouseβ-galactosidase,βGALELISAKit小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)試劑盒

小鼠細(xì)胞凋亡因子 (mouse Fas)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D

小鼠細(xì)胞凋亡因子配體 (mouse Fas-Ligand)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D

mouse Flt3 Ligand   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D

小鼠粒細(xì)胞集落刺激因子 (mouse G-CSF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D

HA重組甲型流感 H5N1 (A/Duck/Hong Kong/p46/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

reMOG 1-125 protein 重組髓鞘少樹突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白1-125 500ugreMOG 1-125 protein 重組髓鞘少樹突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白1-125

IL12A重組人 IL12A / NKSF1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ADPRH Protein Human 重組人 ADPRH / ARH1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CSF3 Protein Human 重組人 G-CSF / CSF3 蛋白

ACVRL1 Others Mouse 小鼠 ALK-1 人細(xì)胞裂解液   HuH-6(人肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞)     MET Others Human 人 c-MET / HGFR 人細(xì)胞裂解液   SHZ-88(大鼠癌細(xì)胞)   ACHN 人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞 豬原代肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞 小鼠原代頸動脈內(nèi)皮細(xì)胞

大鼠肺動脈平滑肌原代細(xì)胞核糖體蛋白L23A(RPL23A)重組蛋白 Recombinant Ribosomal Protein L23A (RPL23A)

ACRV1 Protein Human 重組人 SP-10 / ACRV1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

HAVCR2重組小鼠 TIM3 / HAVCR2 蛋白  Protein

ANGPTL7 Protein Canine 重組狗 ANGPTL7 / Angiopoietin-like 7 蛋白 (His 標(biāo)簽)

TMED4重組人 TMED4 / ERS25 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。