詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡介
公司實驗室分離的大鼠表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞先蛋白酶消化、后-膠原酶混合消化法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的大鼠表皮角質(zhì)形成經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠表皮角質(zhì)形成原代細(xì)胞 | 組織來源 | 皮膚組織 |
英文名稱 | Rat Epidermal Keratinocyte Cells | 貨號 | YS-01X7323 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介:
大鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞分離自皮膚組織;表皮位于動物皮膚的外層,由胚胎時期外胚層形成,具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu),由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層,即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。表皮角質(zhì)形成細(xì)胞是一種能合成角質(zhì)蛋白的上皮細(xì)胞,此類細(xì)胞為表皮的主體,由表皮深層始逐漸增殖、分化,并在成為角化的角質(zhì)細(xì)胞中,細(xì)胞核與細(xì)胞器消失,細(xì)胞亦失去生理功能而脫落。未脫落部分對機體尚有保護(hù)作用,故不必在洗擦身體時用力搓擦,使其過早脫失。表皮角質(zhì)形成細(xì)胞主要分布于表皮基底層,在上皮程序性死亡后,細(xì)胞產(chǎn)生角化并移向表皮。體外培養(yǎng)的表皮角化細(xì)胞容易導(dǎo)致終末分化,不能充分增殖。角質(zhì)形成細(xì)胞最終產(chǎn)生角質(zhì)蛋白,在其向角質(zhì)細(xì)胞演變過程中,一般可以分為四層,即基底層、棘層、顆粒層以及角質(zhì)層。有人把前三層或前二層稱為生發(fā)層或馬爾匹基層。此外,在某些部位,特別在掌跖部位,角質(zhì)層下方還可見到透明層。
培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品:
小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA 試劑盒
Rat apoptosis inducing factor (AIF) ELISA Kit 大鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)試劑盒
Humanα-L-iduronidase,IDUAELISAKit 人αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitfor(MouseGasoiestinalcancerMarker-CA199)ELISAKit小鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199
飲料乙酸激酶法定量試劑盒20次
MouseIerleukin6,IL-6ELISAKit小鼠白介素6(IL-6)試劑盒
魚尿苷二0酸葡萄糖酸轉(zhuǎn)移酶(UDPGT)試劑盒
Human ai thyroid microsome aibody (ATMA/TMAB) ELISA Kit 人抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA/TMAB)試劑盒
Porcineangiopoietieceptoie2,ANG-R-Tie2ELISAkit 豬血管生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforADRP(Humanadiposediffereiation-relatedprotein)ELISAKit人脂肪分化相關(guān)蛋白
血液乙醇脫氫酶II活性熒光定量試劑盒20次
Mousesolubleclusterofdiffereiation30,sCD30ELISAKit小鼠可溶性CD30(sCD30)試劑盒
人脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP4)試劑盒 96T/48T
人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(aFABP)試劑盒 96T/48T
人脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP)試劑盒 96T/48T
人脂肪酶(Lipase)試劑盒 96T/48T
IL1RN重組大鼠 IL-1RA / IL1RN 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
GABA/KLH γ1氨基偶聯(lián)血藍(lán)蛋白 1mgGABA/KLH γ1氨基偶聯(lián)血藍(lán)蛋白
CD22重組人 Siglec-2 / CD22 蛋白 Protein
IL36G Protein Human 重組人 IL36G / IL1F9 蛋白 (aa 18-169)
KIT Protein Mouse 重組小鼠 c-kit / CD117 蛋白
615小鼠網(wǎng)織細(xì)胞性白血病瘤株;L615 小鼠腎足突細(xì)胞 CXCL16 Others Canine 狗 CXCL16 / SR-PSOX 人細(xì)胞裂解液 T24, 人膀胱癌細(xì)胞 胚癌細(xì)胞,Pcc4細(xì)胞 NCI-H1299(人肺癌細(xì)胞) CL-0161MRC-5 豬原代胸腺基質(zhì)細(xì)胞 兔原代卵巢顆粒細(xì)胞
大鼠表皮角質(zhì)形成原代細(xì)胞ADM R, Adrenomedullin receptor 腎上腺髓質(zhì)素受體(抗原 0.5mgADM R, Adrenomedullin receptor 腎上腺髓質(zhì)素受體(抗原)
IL1B Protein Human 重組人 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 標(biāo)簽)
CDNF重組小鼠 CDNF / ARMETL1 蛋白 Protein
F11R Protein Rat 重組大鼠 JAM-A / F11R 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
CDK2AP2重組人 CDK2AP2 蛋白 Protein
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。