人原代肝外胆管上皮细胞专用培养基

人原代肝外胆管上皮细胞培养基由团队精心优化，经过长期测试，本产品可保持人原代肝外胆管上皮细胞最佳的生长状态。

本产品中已包含人原代肝外胆管上皮细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于人原代肝外胆管上皮细胞的培养。

产品主要成分：

运输和保存

运输：放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2个月；-20℃，避光，保存6个月。

1）复苏人原代肝外胆管上皮细胞培养基：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查人原代肝外胆管上皮细胞培养基密度。

2）细胞传代：如果人原代肝外胆管上皮细胞培养基密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗人原代肝外胆管上皮细胞培养基 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若人原代肝外胆管上皮细胞培养基大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待人原代肝外胆管上皮细胞培养基生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

1.使用人原代肝外胆管上皮细胞培养基时应注意无菌操作，避免污染。

2.本产品含有血清和双抗，如无特别需要不用额外再添加血清和双抗，可以直接使用。

3.为保持本人原代肝外胆管上皮细胞培养基的优良使用效果，不宜将其长时间放置于室温或较高的温度环境中。

4.所有产品请于保质期内使用，超出保质期，必须放弃使用。

5.本产品只供进一步科研使用，不可应用于临床等其他方面。

6.培养基冻融后，可能会有少量絮状物析出，不影响人原代肝外胆管上皮细胞培养基正常使用。