化工儀器網(wǎng)
公司動態(tài)
原代細胞純化之酶消化法
閱讀：803 發(fā)布時間：2018-5-7原代細胞酶消化法是比較常用的純化方法，不僅對貼壁細胞可行，能利用上皮細胞和成纖維細胞對胰蛋白酶的耐受性不同，使兩者分開，達到純化的目的，對貼壁細胞與半貼壁及粘附細胞間的分離純化也是十分有效的。
(1)上皮細胞與成纖維細胞的分離純化
兩者在胰蛋白酶的作用下，由于成纖維細胞先脫壁，而上皮細胞要消化相當(dāng)長的時間才脫壁，特別是在原代細胞初次傳代和早期傳代中兩種差別尤為明顯，故可采用多次差別消化方法將上皮細胞和成纖維細胞分開，方法如下：
①采用常規(guī)消化傳代方式 將0.25%胰蛋白酶注入培養(yǎng)瓶內(nèi)兩次，每次加1mL(25mL培養(yǎng)瓶)來回輕搖1-2次，使胰蛋白酶流過所有細胞表面，然后倒掉。
②蓋好瓶塞(或蓋)，將培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)纖維樣細胞變圓，部分脫落，立即加入2mL有血清的培養(yǎng)液終止消化。
③ 用彎頭吸管輕輕吹打纖維樣細胞生長的區(qū)域(可事先在鏡下用記號筆在培養(yǎng)瓶上劃出記號)。吹打時不要用力，也不要吹打上皮細胞生長區(qū)域。吹打結(jié)束后，再用少 量培養(yǎng)液漂洗一遍，然后加入適量培養(yǎng)液于瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，也可重復(fù)上述操作再進行一次，隔幾日后或下次傳代時，再進行上述操作，經(jīng)過幾次處理，就可將成纖維 細胞去除或?qū)烧叻珠_。
(2)骨髓基質(zhì)肌樣細胞的純化
在血液細胞和骨髓細胞靜置培養(yǎng)時，常有許多肌樣細胞和骨髓基質(zhì)細胞貼壁生長，但也有 許多淋巴細胞、單核細胞、粒細胞粘附其上，種類混雜，鑒于粘附細胞貼壁不牢固，也可用酶消化法使粘附細胞脫壁分離，以達到骨髓基質(zhì)細胞或血液中肌樣細胞與 淋巴細胞分開和純化的目的。其方法如下：
①待基質(zhì)或肌樣細胞基本形成單層時，倒去舊液，加入無鈣、鎂PBS漂洗，并用力搖動后倒掉，反復(fù)洗2~3次后，一方面可洗去血清和鈣鎂離子以助酶消化，另一方面又可使大部分粘附細胞被洗掉，但仍留有不少粘附細胞。
②將0.25%胰蛋白酶注入培養(yǎng)瓶內(nèi)，每瓶1mL(25mL培養(yǎng)瓶)，輕輕搖動讓胰蛋白酶流過細胞表面，作用1~2分鐘后再輕輕搖動1~2次后倒去。
③蓋好瓶蓋，在普通顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)基質(zhì)或肌樣細胞由于貼壁較牢固未脫壁，而原先粘附的細胞已浮起，此時再加2mL PBS洗一次倒掉，盡量除去粘附細胞。
④加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，再繼續(xù)用力搖動后倒掉，加入培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。隔幾日或下次傳代前，再進行上述操作，經(jīng)過幾次處理和傳代培養(yǎng)后就可將粘附原代細胞去除，將兩者分開，達到使骨髓基質(zhì)細胞或肌樣細胞純化的目的。
2592-95-2 1-羥基-苯并三氮唑(無水) (HOBt)（ 2-8℃） 英文名稱： CAS號： 1-Hydroxybenzotriazole
123333-53-9 1-羥基苯并三唑一水 英文名稱： CAS號： 1-Hydroxybenzotriazole hydrate
5315-79-7 1-羥基芘 英文名稱： CAS號： 1-HYDROXYPYRENE
23074-42-2 1-氰基金剛烷 英文名稱： CAS號： 1-Adamantanecarbonitrile
143-08-8 1-壬醇;第九醇;辛基甲醇 英文名稱： CAS號： 1-Nonanol;Octyl carbinol;Pelargonic alcohol;Nonalol;Alcohol C-9
18156-74-6 1-*基硅咪唑 英文名稱： CAS號： N-(Trimethylsilyl)imidazole
112-55-0 1-十二硫醇 英文名稱： CAS號： 1-Dodecanethiol
原代細胞