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在操作猪主动脉内皮原代细胞时，需特别注意以下几点以确保实验的稳定性和可重复性：

1. 严格无菌操作：内皮细胞对微生物污染极为敏感，所有操作应在生物安全柜中进行，并确保培养基、试剂及耗材均经过无菌处理。穿戴无菌手套及口罩，定期用75%酒精擦拭台面。

2. 轻柔处理细胞：内皮细胞贴壁能力较弱，传代时需避免过度吹打。建议使用低浓度胰蛋白酶（如0.05% Trypsin-EDTA）消化，并在显微镜下观察细胞形态，待细胞边缘轻微卷曲时立即终止消化，加入含血清的培养基中和酶活性。

3. 优化培养条件：猪主动脉内皮细胞对培养基成分要求较高，建议使用专用内皮细胞培养基（如EGM-2或DMEM/F12添加20%胎牛血清、1%内皮细胞生长因子）。培养箱需维持37℃、5% CO?及95%湿度，避免频繁开关培养箱门导致环境波动。

4. 避免过度传代：原代内皮细胞传代次数过多易导致功能退化，建议限制在5代以内，并定期检测细胞标志物（如vWF、CD31）以确认其表型稳定性。

5.冻存与复苏技巧：冻存时细胞密度应达80%-90%汇合，使用程序降温盒以1℃/min的速率降温至-80℃，再转入液氮长期保存。复苏时需快速解冻，离心后重悬于预温培养基，以降低冰晶损伤风险。

6. 功能实验前的适应性培养：若需进行迁移、成管等实验，建议提前24小时更换为无血清培养基，以同步细胞状态并减少血清干扰。

通过以上细节控制，可显著提升猪主动脉内皮原代细胞的存活率及功能表现，为后续血管生物学研究提供可靠模型。