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ECHO IgM elisa酶聯(lián)免疫試劑盒檢測中樣品的處理:
1．細胞培養(yǎng)物上清：細胞培養(yǎng)物于室溫1000g，離心10分鐘后收集上清，并將標本保存于-20℃，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2．血清：標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g，4℃離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3．血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃,1000g離心15分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4．尿液：無菌收集取初尿，離心除去沉淀物，即可用于檢測，要長期保存尿樣，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿樣冰凍保護液放入-20℃冰箱長期保存。
5．組織勻漿：將組織標本先用PBS洗滌，除去多余血液，勻漿化后放在PBS于-20℃放置過夜，再經(jīng)過二次反復(fù)凍融破膜，5000g，4℃離心5分鐘，取上清即可檢測。注：取樣和樣品處理過程中，防止有毒物質(zhì)對操作人員的危害，要采取相應(yīng)的保護措施。
elisa酶聯(lián)免疫試劑盒(間接法)
(1) 抗原包被：用包被液將PEDV抗原作1∶5稀釋包被反應(yīng)板，每孔100μl，同時設(shè)陰性細胞培養(yǎng)物對照孔，置4℃過夜。
(2) 洗滌：用洗滌液洗滌2次，每次2min，瀝干。
(3) 加入被檢血清：用保溫液將被檢血清作1∶100稀釋，加入反應(yīng)板相鄰的兩個孔中，每孔100μl。同時作陰、陽性標準血清對照，置37℃孵育1h。
(4) 洗滌3次：方法同上。
(5) 加入酶結(jié)合物：用保溫液將酶結(jié)合物作1∶4 000稀釋，加入反應(yīng)孔中，每孔100μl，置37℃孵育1h。
(6) 洗滌3次：方法同上。
(7) 加入底物：每孔100μl，置室溫暗盒內(nèi)顯色20min。
(8) 加入終止液：每孔50μl，靜置5min。
(9) 測定OD值：用檢測儀，于492nm波長，按儀器使用及制定標準要求調(diào)節(jié)儀器，測定各反應(yīng)孔的OD值，記錄結(jié)果。