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測定原代細胞因子生物活性的四種方法
閱讀：1103 發(fā)布時間：2018-5-24朋友們知道，不同的原代細胞因子是有著*的生物學(xué)活性，我們今天來看的也就是相關(guān)它，主要是來看如何測定，這里整理了幾種細致的方法，下面我們就一起來看上海恒遠詳說實驗測定細胞因子生物活性的四種方法。
1、促進細胞增殖和增殖抑制法
檢測細胞因子促生長活性或抑制生長活性是將不同稀釋度的待測樣品或細胞因子標準品與培養(yǎng)的細胞株共同培養(yǎng)一定時間，然后檢測增殖的細胞數(shù)。前者的增殖細胞數(shù)與細胞因子的含量成正比，而后者的增殖細胞數(shù)與細胞因子的含量成反比。常用的檢測細胞增殖的方法有3H-TdR摻入法、比色法、染色法和直接計數(shù)法等。其中測定細胞代謝酶反應(yīng)細胞增殖數(shù)的比色法包括 MTT、XTT、MTS和NAG等方法，可在酶標檢測儀上自動化檢測，且不接觸同位素，較為常用。此外，測定代謝產(chǎn)物熒光強度的方法也可檢測增殖細胞數(shù)，如ATP法和cAMP法。細胞因子還能誘導(dǎo)靶細胞表達某些表面分子或分泌一些蛋白質(zhì)，可以用熒光素標記抗體檢測表達相應(yīng)分子的細胞數(shù)，或用特定方法測定細胞分泌的蛋白質(zhì)，間接了解細胞因子的活性。
各種集落刺激因子、作用于造血系統(tǒng)的不同細胞，可促進其增殖及在半固體瓊脂凝膠系統(tǒng)中克隆培養(yǎng)骨髓細胞的集落形成，故可采用集落形成試驗研究CSF的水平。
2、細胞毒活性測定法
許多細胞因子針對轉(zhuǎn)化的細胞及病毒感染的細胞具有溶細胞或抑制細胞生長的活性。檢測細胞因子溶細胞/細胞毒活性或抑制生長活性是將不同稀釋度的待測樣品或細胞因子標準品與培養(yǎng)的細胞株共同培養(yǎng)一定時間，然后檢測存活的靶細胞數(shù)，并與對照比較求得溶細胞或抑制細胞生長的百分率，或以O(shè)D值對樣品稀釋度作圖，繪制標準品的劑量反應(yīng)曲線，從曲線上求得引起相應(yīng)反應(yīng)的待測樣品的含量。檢測活靶細胞數(shù)的方法同促細胞增殖法。
生物活性檢測法敏感性往往高于細胞因子的免疫學(xué)檢測法，且不需要各種標記的特異性抗體，可直接反映待測細胞因子的活性水平。用生物學(xué)活性檢測法得到的細胞因子含量一般以活性單位來表示。但本法易受多種因素的干擾，且不能區(qū)分樣本中某些具有相似或相反生物學(xué)效應(yīng)的細胞因子；長期培養(yǎng)的靶細胞敏感性可發(fā)生變異或所使用的不同靶原代細胞對同一種細胞因子的較敏感性存在差異等。使檢測結(jié)果難以統(tǒng)一標準。同時，因大多數(shù)細胞因子在體液中含量甚少，難以直接測定，一般均需要先進行體處誘導(dǎo)細胞因子產(chǎn)生，才能進行上述細胞因子活性檢測。
熱休克蛋白90αIgG 人補體7(C7)
熱休克蛋白HSP105IgG 人補體3裂解產(chǎn)物(C3SP)
熱休克因子1IgG 人補體1抑制物(C1INH)
熱休克轉(zhuǎn)錄因子2IgG 人補體1q(C1q)
人、大、小鼠、羊、牛beta內(nèi)啡肽IgG 人玻連蛋白/體外粘連蛋白(VN/CD51+CD61)
人、大、小鼠膜粘連蛋白 IIgG 人波形蛋白(VIM)
人鼻咽癌癌基因IgG 人丙型肝炎IgM(HCV-IgM)
人促黃體生成素受體IgG 人丙型肝炎IgG(HCV-IgG)
人宮頸癌基因/bri3結(jié)合蛋白IgG 人丙酮酸脫氫酶E1(PDH E1)
人巨細胞病毒PP65/CMV低基質(zhì)磷脂蛋白IgG 人丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)
原代細胞